基因表达的定量检测概述.ppt

qPCR可能出现的问题及解决方法 阴性对照有信号 * * * * * * 基因表达的定量检测分析 基因表达的定量检测方法 1. 蛋白表达水平的检测： 1）定量检测分析： western blotting、ELISA、HPLC 2）蛋白质功能分析： 蛋白质亚细胞定位分析：免疫荧光技术 蛋白相互作用研究：酵母双杂交、免疫共沉淀（IP）、 荧光共振能量转移（FRET） 酶活性检测：ELISA、HPLC 2. mRNA表达水平检测： 1）半定量RT-PCR 2）Northern blot 3）实时荧光定量PCR（Realtime PCR） Northern blot 杂交 是用来检测真核生物RNA的表达量和大小，以估计其丰度的实验方法，可以从大量的RNA样本同时获得这些信息。 其基本步骤包括： 1. 完整mRNA的分离 2. 根据RNA的大小通过琼脂糖凝胶电泳对RNA进行分离 3. 将RNA 转移到固相支持物（尼龙膜）上，在转移的过程中， 要保持RNA 在凝胶中的相对分布 4. 将