分子生物学课件MB-10 expression regulation in eukaryote.ppt

核小体结构如图所示: ◆DNA甲基化的生物学效应 抑癌基因甲基化 不表达 2、反式作用因子 三个功能结构域：DNA结合结构域；转录激活结构域；二聚化结构域（蛋白质与蛋白质结合） 能识别并结合顺式作用元件(cis-acting element) 正调控与负调控 是最简单的结构基序之一，该结构域长约20个aa，主要是两个α-螺旋区和将其隔开的β转角。C端螺旋被称为识别螺旋区，可与DNA大沟中的碱基直接接触。另一端螺旋无特异性,与DNA骨架接触 一段肽链上每隔7个aa出现一个leu，借助于leu侧链的疏水相互作用而形成同向平行的拉链状，进而形成二聚体结构。 由肽链氨基端20～30个富含赖氨酸（Lys）和精氨酸（Arg）的结构域与DNA结合。 3、RNA干扰（RNA inference） Control of Gene Expression RNAi技术 反义RNA的核苷酸序列与mRNA互补。当两者互补结合时，可阻止mRNA翻译产生蛋白质。这样即使基因有活性也不会有蛋白质产物，从而抑制基因的表达，实现删除基因的目的。 4、反义RNA 反义基因在耐储藏番茄育种中的应用 四、翻译水平的调节 1、mRNA的稳定性 ? 原核生物mRNA的半衰期很短，平均大约3min。高等真核生物迅速生长的细胞中mRNA的半衰期平均3h。在高度分化的终端细胞中许多mRNA极其稳定，有的寿命长达数天。 polyA尾影响mRNA的稳定性 polyA逐步消减到完全消失，常常是mRNA开始降解的先兆。 polyA尾调节mRNA的翻译效率 带有polyA的mRNA比脱尾的相应mRNA翻译效率高得多，且影响程度与polyA尾的长度呈正相关。 polyA尾的调节作用 polyA的长度与半衰期有关 不同种类mRNA的polyA长短不一，不同进化程度的polyA的平均长度也有差异。哺乳动物细胞polyA平均长度为200-250个腺苷酸，而低等真核细胞的polyA较短，平均为100nt。mRNA的半衰期与polyA尾的长度呈正相关。 2、5’UTR对翻译的调节 5’端m7G帽子结构 保护mRNA免遭5’外切酶的降解，增加mRNA的半衰期；有利于mRNA从细胞核向胞质转运。 mRNA前导序列 前导序列长度在17-80nt的范围内，体内翻译效率与前导序列的长度成正比。 eIF-4F的磷酸化能提高翻译速度 真核细胞翻译起始因子4F（ eIF-4F ）由3个基本亚基组成（eIF-4E，eIF-4G，eIF-4A），其中eIF-4E可直接与mRNA5‘端m7G帽子结构结合。当其被磷酸化后，可显著提高翻译速度。 eIF-2α的磷酸化抑制翻译起始 3、蛋白质修饰对翻译效率的影响 6、基因重排（rearrangement） 将一个基因从远离启动子的地方移到距它很近的位点从而启动转录，这种方式被称基因重排。 通过基因重排调节基因活性的典型例子是免疫球蛋白结构基因的表达。 免疫球蛋白的肽链主要由可变区（V区）、恒定区（C区）以及两者之间的连接区（J区）组成 V、C和J基因片段在胚胎细胞中相隔较远。编码产生免疫球蛋白的细胞发育分化时，通过染色体内DNA重组把3个相隔较远的基因片段连接在一起，从而产生了具有表达活性的免疫球蛋白基因。 二、真核生物转录水平的调节 顺式作用元件（cis-acting element）：指可影响自身基因表达活性的DNA序列。 非编码序列 包括启动子、增强子和沉默子 反式作用元件（trans-acting element）：能直接或间接地识别或结合在各类顺式作用元件核心序列上，参与调控靶基因转录效率的蛋白质。 激活因子 阻遏因子 1、顺式作用元件（cis-acting element） （1）启动子（promoter） RNA聚合酶识别、结合和开始转录的一段DNA序列，含有RNA聚合酶特异性结合和转录起始所需的保守序列。 （2）增强子（enhancer） 能使基因转录频率明显增加的DNA序列。 作为基因表达的重要顺式调控元件，增强子具有以下几个特点： 增强效应十分明显，一般能使基因转录频率增加10-200倍。 如：经人巨大细胞病毒增强子增强后的珠蛋白基因表达频率比该基因正常转录高600-1000倍! ② 增强效应与其位置和取向无关 不论增强子以什么方向排列（5→3或3→5），甚至和基因相距30 kp，或在基因下游，均表现出增强效应 ③ 多为重复序列，一般长约50bp，适合与某些蛋白因子结合。 其内部常含有一个核心序列：(G)TGGA/TA/TA/T(G)，是 产生增强效应时所必需的? ④ 增强效应有严格的组织和细胞特异性