分子生物学课件第七章 蛋白质的生物合成－翻译.ppt

缺失或插入核苷酸引起三联体密码的改变 他们的方法是: 1 去模板：用DNAase处理E.coli抽提物，使DNA降解，除去原有的细菌模板。 2 加入pol U：合成了多聚苯丙氨酸 这一结果不仅证实了无细胞系统的成功，同时还表明UUU是苯丙氨酸的密码子。 分别加入polyA，polyC和polyG结果相应地获得了多聚赖氨酸，多聚脯氨酸和多聚甘氨酸。 3 按比例加入２种核苷混合的多聚物 由于当时还未分离RNApol酶，无法按设计的模板来合成RNA，Nirenberg又想出了一种新的方法，就是按一定的碱基比例来合成RNA。 比如在底物中加5份的UDP和1份的GDP， 碱基比为U：G＝5：1， 它们能组成8种三联体： UUU，UUG，UGU，GUU， GGG，GGU，GUG，UGG。 U和G随机加入到三联体中，这样按比例各个位置上进入U和G的概率不同，如氨基酸测定结果： 如UUU：UGG＝（5?5?5）:（5?1?1） ＝ 25 ： 1 同理UUU：UUG ＝5 ：1， 根据检测结果推测: 苯丙氨酸（UUU）：半胱氨酸（UGU） ＝ 5 ： 1 苯丙氨酸（UUU）：缬氨酸（GUU） ＝ 5 ： 1 苯丙氨酸（UUU）：甘氨酸（GGU） ＝ 24 ： 1 核糖体结合实验 1964年Nirenberg又采用核糖体结合实验 1 tRNA和氨基酸及三联体的结合是特异的； 2 上述结合的复合体大分子是不能通过硝酸纤维滤膜的微孔，而tRNA-氨基酸的复合体是可以通过的。 以特定的共聚物为模板指导多肽的合成 遗传密码表 密码子、反密码子配对的摆动现象 三中读二一般可分为三种情况： 1 第１,２两个碱基形成６个氢键时，可三中读二。 如CCX，CGＸ，GCX和GGX。 2 第1 ,2两个碱基形成4个氢键时,不可三中读二。 如AAX，AUX，UAX和UUX。 3 第1,２两个碱基形成５个氢键时, 当第二个碱基为嘧啶时，可三中读二； 如UCX，ACX，CUX和GUX。 当第二个碱基为嘌呤时则不能三中读二， 如CAX， GAX，UGX和AGX。 二、 tRNA 1. tRNA的结构 50~95nt组成，其中22nt是恒定的，呈三叶草结构; 5’端和3’端配对（常为7bp）形成茎区，称为受体臂（acceptor arm）或称氨基酸臂。在3’端永远是4个碱基（XCCA）的单链区，在其末端有2’-OH或3’-OH，是被氨基酰化位点,此臂负责携带特异的氨基酸。 TψC常由5bp的茎和7nt的环组成，此臂负责和核糖体上的rRNA识别结合； 反密码子环 anticodon loop 常由5bp的茎区和7Nt的环区组成，它负责对密码子的识别与配对。 D环 D loop 的茎区长度常为4bp，也称双氢尿嘧啶环。负责和氨基酰tRNA聚合酶结合; 额外环 extra loop 可变性大，从4Nt到21Nt不等，其功能是在tRNA的L型三维结构中负责连接两个区域（D环－反密码子环和TψC-受体臂）。 tRNA的三级结构示意图 倒L形 三、核糖体的结构和功能 ? 原核和真核生物核糖体的组成及功能 核糖体亚基 rRNAs 蛋白 RNA的特异顺序和功能 细菌 70S 50S 23S 2904b 31种 L1-L31）含CGAAC和GTψCG互补 2.5×106D 5S 120b 66%RNA 30S 16S 1542b 21种 S1-S21 16SRNA CCUCCU 和S-D 顺序 AGGAGG 互补 哺乳动物 80S 60S 28S 4718b 49种 有GAUC和tRNAfMet的TψCG互补 4.2×106D 5S 120b 60%RNA 5.8S 160b 40S 18S 1874b 33种 和Capm7G结合 核糖体的组成 蛋白质生物合成体系 小亚基与mRNA的结合 三种起始因子 IF1 IF2 IF3 功能 辅助IF3 结合30S小亚基，占据A位点 特异识别fmet-tRNAifmet形成fmet-tRNAifmet - IF2-GTP 有GTP酶活性 结合30S小亚基使核糖体解离 促进30S小亚基与mRNA结合 起始和延伸Met-tRNAs的区别： ⑴两种tRNA本身有差别； ⑵氨基酸的状态不同。 由转肽酶 transpeptidase 催化的肽键形成过程 转肽 酶 肽键 位置 转位（Translocation 转位 在A位的二肽链从A位进入P位 酶 位置 方向 转位酶----EF-G 有GTP酶活性 P位：肽-tRNA-mRNA A位：空留 下一个AA进入 mRNA： 从5’ 3’ 移动 1个带有肽链的tRNA：从A位 P位 肽链合成：