第二章基因操作的主要技术原理 基因工程课件.ppt

两种操作方式： 1. 将不同的寡核苷酸与固定在滤膜上的靶DNA序列样品进行杂交 2. 应用寡核苷酸矩阵芯片的DNA杂交测序法 杂交的检测： 磷光成像仪和图象分析软件 错配的碱基会导致杂交信号强度下降。 6mer 500bp 7mer 2000bp 8mer 8000bp SBH的应用： 1.检测靶DNA的单碱基突变 2. 用于不同片断之间的序列比较分析 （同源性序列检测） 3. 用表达序列标签（EST）的矩阵芯片，检测不同类型细胞中或不同生长发育状态下的细胞中特定基因的表达状况。 4. 检测传统的测序技术所得DNA片断的核苷酸序列数据。 硫酸二甲酯（DMS）足迹实验： DMS能使裸露的鸟嘌呤（G）残基甲基化，而六氢吡啶会对甲基化的G残基作特异的化学切割。 而与蛋白结合的DNA片断上的G残基，不会被DMS甲基化，从而避开了六氢吡啶的切割作用。于是在DNA片断的序列中，不存在具这些G残基末端的DNA片断，出现了空白区。 甲基化干扰实验（methyltion interference assay） 根据DMS（硫酸二甲酯）能够使G残基甲基化，而六氢吡啶又能够特异切割甲基化的G残基这一原理，设计出了另一种研究DNA与蛋白质相互作用的实验方法，即甲基化干扰实验。这种技术可以检测靶DN