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Meselson-Stahl 试验 DNA含氮（nitrogen），用氮同位素标记DNA分子 N14 有7 个质子（protons）和7个中子（neutrons） N15 叫 “重氮” ，含 7 protons和8 neutrons。 DNA复制机制： DNA 复制是半保留复制。 每条亲代链做模板用于合成互补的子代链。 RNA 引发 OriC处的起始 oriC含有 4 X 9bp 序列，是起始因子DnaA的结合位点. DnaA 的合成与细菌的生长速度偶联，保证DNA的复制也与生长速度偶联。 30-40个 DnaA 形成一个复合物结合到4 × 9bp 序列, 使临近的3 ×13 bp 的AT丰富的区域熔解，为起始因子DnaB和DnaC 的结合作准备。 细菌复制原点序列 DnaB 是一种解旋酶，能水解 ATP 获得能量熔化双链 DNA。 Ssb (single-stranded binding protein) 覆盖到解链的 ssDNA 上。 DNA 引物酶 (DnaG) 合成一段短的 RNA 引物用于起始前导链的合成。 引发体: DnaB与DnaG结合成的复合物。 E. coli中复制的起始 Summary of initiation at OriC: DNA pol.的组装及活性的发挥得益于 ?-亚基二聚体形成的 “clamp” Replisome(复制体): 在大肠杆菌细胞中, DNA 聚合酶二聚体, 引发体 结合成大的复合物，以900 bp/sec的速度合成DNA。 Pol III如何保证同步合成？？？ 复制叉处的主要蛋白因子 拓扑异构酶 解旋酶 单链DNA结合蛋白 (SSB) 引物酶 DNA连接酶 E. coli DNA 聚合酶 E2.2.6 环状DNA的复制模式 φX174噬菌体由一个单链环状DNA组成，这条链称为正（+）链；合成的互补链称为负（一）链。双链体的复制以滚环复制方式进行。 线性DNA复制时末端问题的解决方案 (1）将线性复制子转变为环状或多聚分子。如T4和λ (2）复制时利用自身线性DNA末端的重复序列，通过末端互补形成连环分子－－－E.coli T7噬菌体 (3）蛋白质介入，在真正的末端上启动。腺病毒，φ29噬菌体DNA和脊髓灰质炎病毒RNA具有与5`端碱基共价结合的蛋白质。 (4）在DNA末端形成发夹。使分子没有游离末端。 Poxviruses (痘病毒 ) DNA、草履虫（Paramecium）的线性线粒体DNA的复制中就形成了一种交联； (5）末端可变。真核生物染色体采用这种方式。 (1)通过将线性复制子转变为环状或多聚分子(Lambda DNA) （5） 末端长度可变 2.3.1试验体系 1. 猿猴空泡病毒40 (simian virus 40, 5 kb)，能形成核小体，微小染色体。 哺乳动物染色体DNA上有 50 000-100 000 个复制子。 染色体上不同部位DNA的复制: 1. 在细胞周期的S期的某个特定时间，一个簇中的 20-50个复制子同时起始复制； 2. 在起始区随机起始 Yeast origin: [A/T]TTTAT[A/G]TTT[A/T] 被起始识别复合物结合； 后者又被CDK激活。 ARS: autonomously replicating sequence, 自主复制序列 CDK:依赖细胞周期蛋白的激酶 2. DNA pol δ: 取代DNA pol α后负责合成前导链； 合成较长的DNA。 核基质 细胞核中不溶性的蛋白纤维骨架； 作为DNA复制、基因转录等的框架； 复制工厂。 端粒: 真核染色体DNA末端含有多拷贝的简单重复序列，不含遗传信息。 端粒酶: 含一个短的RNA分子, 能部分与端粒DNA的重复序列配对；此外还含有反转录酶； 与细胞的衰老和癌症的发生相关。 人类的端粒DNA: 5’-TTAGGGTTAGGG(TTAGGG)nTTAGGG-3’ 3’-AATCCCAATCCC-5’ DNA 复制 = 合成新的DNA Why? 为减数分裂和有丝分裂作准备。 When? 细胞周期的S期 Where? 核内 Whom? 核苷酸、酶类、亲代DNA How? 亲代DNA两条链分别作模板，合成新的子代单链 Size of replicons: Yeast 40 kb Mammals 100 kb Prokaryotic 1000 kb Okazaki fragme