基础生化实验-DNA聚合酶连锁反应DNA电泳介绍.docxVIP

DNA聚合酶连锁反应 DNA电泳分析 DNA聚合酶连锁反应 目的： 聚合酶连锁反应(polymerase chain reaction, PCR)能短时间增殖、放大特定的DNA片段，而使得原先可能才只有几个pg的DNA增加至mg，以利于其它实验的进行。 原理： (1)变性反应(denaturation),使DNA的两股分离。 (2)缓冷配对反应(annealing)，使引子与目标DNA配对。 (3)延长反应(extension)，合成新的DNA股。 每一个循环操作可使DNA的量添加一倍，若重复操作多次，以数学公式计算，DNA增加的量将会是2n，n是代表重复操作的次数。在理想的聚合酵素链锁反应条件下，DNA是以几何级数增加。理论上，一个DNA分子若重复操作PCR 25次，那么DNA的分子数将会扩增分子。这个DNA的量已足够在Agarose凝胶电泳中观察到。 试剂、器材、仪器： (1)10x PCR buffer 成分：500mM KCl、100mM Tris-HCl、pH8.8、15mM MgCl2、1% TritonX-100 10μ1※Taq DN聚合酶需要有Mg2+( MgCl2)才能进行反应；但是Mg2+会和带负电的 template、primer和dNTP结合，加强双股DNA的键结。所以Mg2+的浓度会影响PCR的效率和特异性，Mg2+过低