操纵子(中)1.ppt

操纵子 操纵基因是DNA上阻抑物结合、阻碍邻近启动子的启动而抑制转录的位点。 阻遏蛋白与DNA或RNA上的操纵基因结合，从而分别抑制转录或翻译。结构基因编码RNA或蛋白质(包括结构蛋白、酶和调控蛋白）。调控基因则通过编码蛋白质或RNA来调节其它基因的表达。 调控基因编码的蛋白质作用于DNA的靶位点上。 负调控中，反式作用的阻抑物结合到顺式作用的操纵基因上以关闭其转录。 正调控中，反式作用因子必须与顺式作用元件结合，才能使RNA聚合酶能在启动子处起始转录。 操纵子是细菌基因表达和调节的单位，包括结构基因和DNA上能被调控蛋白辨认的控制元件。 lac操纵子包括顺式作用的调节元件和编码蛋白质的结构基因。长度约6000bp，。上游的lacI 具有自己的启动子和终止子。lacI 的末端紧接着启动子P。操纵基因O位于转录单位最前端26个bp, lacZ基因从第39个bp开始，随后是lacY 、lacA 基因和终止子。 在lac操纵子的转录起始位点周围，阻抑物和RNA聚合酶的结合位点是重叠的。 添加诱导物可引起lac mRNA的迅速产生,酶的合成则有一个短暂的延迟;去除诱导物可引起酶合成的快速终止。 阻抑物与操纵基因的结合使lac操纵子处于失活状态；诱导物的添加可释放阻抑物，从而允许RNA聚合酶起始转录。 操纵基因的突变是组成型的，因为操纵基因不能结合阻抑物；这使得RNA聚合酶得以通过启动子。Oc 突变是顺式作用, 因为它们只影响相邻的结构基因。 使lacI 基因失活的突变可引起操纵子的组成型表达，因为突变的阻抑物不能与操纵基因结合。 lac 操纵基因具有对称性序列。按转录起始点为+1 ，将这一序列计数。阴影区表示对称的序列。 诱导物是与游离的阻抑物结合以干扰平衡（左），还是直接与结合在操纵基因上的阻抑物结合呢（右）？ Lac阻抑物单体的结构，含有数个独立的结构域。  Lac阻抑物核心区域的晶体结构表明了四聚体中各单体之间的相互作用。 头段与DNA大沟上两个连续的转角结合。诱导物的结合改变了头部与核心的相对取向，使头段不能与大沟结合，从而降低了与操纵基因的亲和力。 当阻抑物四聚体与两个操纵基因结合时，两个结合位点之间的DNA被弯曲成一个紧密的环。（成环DNA中心的蓝色结构代表CAP，另一个结合在此区域的调节蛋白。）  Lac 阻抑物特异性地紧密结合在操纵子上，但它能被诱导物释放。所有平衡常数都为 M-1。  事实上细胞内所有的阻抑物都与DNA结合。 阻抑物可作用于具有操纵基因靶序列拷贝的任何基因座。自主调控 指的是基因产物或者抑制（负自主调控），或者激活（正自主调控）它本身的编码基因的表达。 trp 阻抑物识别三个座位的操纵基因。保守碱基用红色表示。转录起点和mRNA是可变的。 相对于启动子，操纵基因可能存在于不同的位置。 调控线路是多种多样的，并且可设计成正调控或负调控来实现诱导或抑制。 cAMP有一个磷酸基团能够与糖环的 3和5 位结合。 通过降低cAMP水平使得葡萄糖抑制操纵子的转录，而cAMP水平对CAP的活性是必需的。 CAP的共有序列中含有非常保守的五聚体 TGTGA 及一个该序列的反向序列 (有时出现) (TCANA). CAP蛋白可在不同位点与 RNA 聚合酶结合。 凝胶电泳技术可用来分析折叠弯曲的情况。 CAP可在中心对称处将 DNA弯曲成 90° 应急因子催化 pppGpp 和 ppGpp的合成； 核糖体蛋白能够使 pppGpp 去磷酸化成为 ppGpp。 在通常的蛋白质合成中，在 A 位存在氨基酰 -tRNA是转肽酶进行肽链转移的信号，随之核糖体在 EF-G的催化下移动；但是在应急条件下，当存在空载tRNA 时，会促使RelA 蛋白合成 (p)ppGpp ，并驱逐 tRNA。 核苷酸水平调控了rRNA转录起始。 与mRNA起始区域的序列结合的蛋白质可能发挥翻译阻抑物的作用。 二级结构能够控制起始。 在 RNA 噬菌体, 只有一个起始点可被首先利用， 而先前的翻译会改变 RNA构象，这样另一个起始点就可以被使用。 Figure 10.23 shows that reducing the level of cyclic AMP renders the (wild-type) protein unable to bind to the control region, which in turn prevents RNA polymerase from initiating transcription. So the effect of glucose in reducing cyclic AMP levels is to deprive the relevant