细胞传代.docVIP

贴壁细胞：弃去培养液，加胰酶消化，加培养液终止胰酶作用，吹打成悬液，分装传代。由于贴壁细胞贴壁生长，接触抑制，长满一瓶后贴壁较紧，不易取出。这时必须用胰蛋白酶或者胶原蛋白酶处理，使其分散开后取出，然后在放入新的培养瓶中培养。悬浮细胞：离心，弃上清液，加新鲜培养基，分装传代。悬浮细胞其实也有贴壁现象，只是贴壁不牢。可以直接用吹打发是细胞掉落下来，进行传代。 传代培养中的细胞传代培养（subculture），当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，一则细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度减慢甚至停止；另一方面也会因营养物不足和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。此时就需要将培养物分割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿（瓶）内，再进行培养。这个过程就称为传代（passage）或者再培养（subculture）。对单层培养而言，80%汇合或刚汇合的细胞是较理想的传代阶段。 传代方法 1．悬浮生长细胞传代 传代培养中的细胞 离心法传代：离心（1000转/分）去上清，沉淀物加新培养液后再混匀传代。2．半悬浮生长细胞传代（Hela细胞） 此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可用直接吹打法使细胞从瓶壁脱落下来，进行传代。 3．贴壁生长细胞传代 采用酶消化法传代。常用的消化液有0.25%的胰蛋白酶液。 培养材料 1、无菌磷酸生理缓冲液 Dulbecco’sphosphate