细胞核的分离与核酸的鉴定.ppt2.pptVIP

实验细胞核的分离与鉴定胡宏骏1020150748王兴华1020150745黄锡燊10201507431.掌握离心技术的原理及离心机的使用；2.熟悉提取分离细胞核、细胞质的方法；3.熟悉鉴定核酸的方法；实验原理一、核体的制备核体是指含有少量细胞质并由质膜包裹的细胞核。因为在实际中我们不可能100%的得到细胞核，因此,棉纱，我们只能制备含有少量细胞质的核体，核体的制备方法主要有吸出法和原生质体破裂法等。在本实验中我们采用排除法来制备核体。排除法制备核体是通过细胞松弛素和高速离心的作用使细胞核排出，然后从离心管底部沉淀中收集获得核体。二、细胞核的鉴定因为细胞核中主要含DNA，是碱性蛋白。因此将分离出的核体经三氯醋酸处理,屏风，抽提掉核酸后，用酸性固绿溶液染色，可以使细胞核内的碱性蛋白显示出来。【实验步骤】1．细胞培养：将欲分离微核体和细胞质的动物接种于脱核塑料圆板上，使适宜的培养基中于37℃的条件下培养，使细胞固定在脱核塑料圆板上，脱核塑料圆板的直径应稍小于离心管的直径，使用前先用水洗干净再经过乙醇杀菌处理。2．秋水仙碱处理：细胞培养一段时间以后，加入0.1ug/ml的秋水仙碱，处理细胞48～60h,滤纸，使细胞形成多个大小不同的核体。3．细胞松弛素处理：在离心管内加入5ml预热至37℃的细胞松弛素B溶液将固定有动物细胞的圆板面朝下放入离心管内，固定圆板位置后，再加入10ml3