国内三种主流圆环病毒2型抗体检测试剂盒的比较以及应用、、、、、-副本介绍.doc

摘要:为调查当前规模猪场2型圆环病毒疫苗免疫使用情况、比较实验室常用2型圆环病毒Elisa抗体检测试剂盒的检测结果，评估猪场疫苗免疫后的抗体消长规律，利用A（进口）、B（国产）、C（国产）三种Elisa抗体检测试剂盒，对来自山东、河南、河北、天津4个规模化猪场的280份血清进行检测。结果显示，未免疫母猪群血清阳性率高，2型圆环病毒带毒严重；免疫仔猪抗体水平逐步上升，猪群的生产效益有较大改善；同时发现3种试剂盒的检测结果存在一定差异。通过实验发现圆环病毒疫苗的免疫对猪只有很好的保护力，猪场生产成绩也有很大改善，因此建议猪场及时免疫圆环疫苗，降低疾病发生风险，提高猪场生产效益。 实验室常用2型圆环病毒Elisa抗体检测试剂盒的结果分析比较 目的:比较国内三种主流圆环病毒 2型抗体检测试剂盒在实际检测中的差异，分析三种试剂盒的检测的阳性率以及离散度来评价三种试剂盒在实际应用中的作用，以此来指导猪场圆环疫苗的免疫工作。方法：通过检测4家规模化猪场不同胎次母猪，不同日龄仔猪和育肥猪的280份血清，比较三种试剂盒检测的阳性率以及离散度的差异，结合猪场实际免疫情况对三种试剂盒的检测结果进行评估，同时评价猪场圆环疫苗的免疫效果，为猪场免疫程序的制定提供合理化建议。结果：三种PCV-2检测试剂盒检测结果参差不齐。进口的试剂盒A抗体阳性检出率较高，国产试剂盒B和C阳性检出率相对较低。纵观四个猪场抗体检测的离散度发现试剂盒A整体比较稳定，抗体整齐度较好。而B和C离散度则起伏较大，抗体整齐度较差。 结论：国产PCV2检测试剂盒质量参差不齐，而进口试剂盒质量相对较好。 关键词：圆环病毒 检测试剂盒 抗体水平 疫苗 前言：猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2.pcv2)主要引起断奶仔猪多系统衰竭综合症（Postweaning multisystemic wasting syndrome ,PMWS)，也同猪皮炎与肾炎综合征、增生性坏死性肠炎、猪呼吸道综合征、繁殖障碍、先天性颤抖、胎儿心肌炎及肠炎等疾病相关。 PCV-2的诊断方法繁多，依据技术理论可分为两大类：其一是基于分子生物学建立诊断方法，如核酸原位杂交法（ISH)、常规PCR、荧光定量PCR等，主要用于发病后快速诊断猪群带毒状况及种类的检测；其二是基于免疫学建立的诊断方法，如酶联免疫吸附试验（ELISA）、间接免疫荧光技术（IFA）、免疫过氧化物酶单层实验（IPMA）、免疫组织化学法（IHC）等，其中ELISA以其灵敏、特异、操作简便快速等优点，被广泛使用，常用于评价猪群的感染压力、疫苗免疫效果和最佳免疫程序的确定。本实验所用的进口试剂盒A是采用重组圆环病毒2型的N蛋白包被微孔板，用来检测血清中的N蛋白抗体；国产试剂盒B和C均采用圆环病毒2型ORF2基因的工程表达产物包被微孔板，用来检测血清中的抗圆环病毒2型ORF2蛋白特异性抗体。 1 材料和方法 1.1材料 1.1.1样品信息 所用样品为天津，山东，河南，河北4家规模化养殖场送检血清，单个猪场存栏母猪数均在1000头以上，血清按检测要求有目的性的采集，每个猪场采集猪只日龄相近。样品信息情况见表1. 表 1.2.2结果判定 进口猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒A：S/P值≥0.4为阳性，S/P＜0.3为阴性，之间为可疑。 国产猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒B：OD值＞0.42为阳性，OD值＜0.38为阴性，之间为可疑。 国产猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒C：S/P值≥0.25为阳性，S/P≤0.16为阴性，之间为可疑。 2 结果与分析 2.1 猪场免疫情况调查 4个猪场使用的圆环疫苗均是进口的圆环灭活疫苗，免疫程序为：仔猪14日龄1头份/次，母猪均未免疫圆环疫苗。 2.2 三种PCV-2试剂盒抗体检测 检测结果显示（表2），试剂盒A检测四个猪场的阳性率分别为100%（70/70）、95.71%（67/70）、95.71%（67/70）、98.57%(69/70)；离散度分别为26.21%、31.09%、43.54%、29.03%。试剂盒B检测四个猪场的阳性率分别为31.43%（22/70）、95.71%（67/70）、74.29%（52/70）、24.29（17/70）；离散度分别为90.44%、46.87%、52.65%、86.07%。试剂盒C检测四个猪场的的阳性率分别为68.57%（48/70）、97.14%（68/70）、92.86%（65/70）、74.29%(52/70)；离散度分别为77.46%、39.13%、50.45%、68.24%。结果表明，三种试剂盒检测阳性率除山东猪场外，结果差异较大。其中以进口试剂盒A检测阳性率较高，C次之，B检出阳性率整体较低。离散度进口试剂盒A较