7.1 制备薄层色谱技术.pptVIP

与经典制备色谱相比，CTLC相比具有以下优缺点： * 7.1 薄层色谱法 ★ 薄层色谱，或称薄层层析(thin—layer chromatography)，是以涂布于支持板上的支持物作为固定相，以合适的溶剂为流动相，对混合样品进行分离、鉴定和定量的一种层析分离技术。 ★ 属于固-液色谱的一种 7.1.1 基本原理 薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同，使在移动相（溶剂）流过固定相（吸附剂）的过程中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，从而达到各成分的互相分离的目的。 7.1.1 基本原理 （1）展开温度 ; （2）薄层厚度：0.1mm-0.2mm-0.25mm; （3）吸附剂含水量; （4）层析缸中蒸汽; （5）其他：展开剂的pH、展开时间、展开距离、样品浓度、点样量、薄，层板所用吸附剂中的粘合剂的种类和用量等。 7.1.2 常规制备薄层色谱法(PTLC) 经典的制备型薄层色谱与现代制备液相色谱法相比,具有设备简单，所需资金投入最少(Sherma和Fried，1987)。PTLC可以用来分离毫克量级到克级的样品。 7.1.2.1 薄层板的制备 （1）吸附剂的选择 被分离的物质的性质（如极性、酸碱性和溶解度等）； 吸附剂的吸附能力的强弱。 有机吸附剂（如聚酰胺、纤维素和葡聚糖等）； 无机吸附剂（如氧化铝、硅胶、硅藻土、磷酸钙、磷酸镁 和硅酸钙镁等） 吸附剂 分类： 吸附剂 选择依据 7.1.2.1 薄层板的制备 （2）展开剂的选择 ◆ 常在展开剂中加入的酸性物质或碱性物质防止拖尾现象： 一般先选择单一溶剂作展开剂 ； 难分离组分用多元的溶剂： 常用酸性物质：甲酸、乙酸、磷酸和草酸等； 常加入的碱性物质：二乙胺、乙二胺、氨水和吡啶。 先用一种极性较小的溶剂为基础溶剂展开混合物，若展开不好，用极性较大的溶剂与前一溶剂混合，调整极性，再次试验，直到选出合适的展开剂组合。 薄层板最好先用溶剂展开一次 ； 上样前先将样品溶于少量溶剂 ； 适当的点样量 ； 尽量用小的点样管 ； （1）点样 7.1.2.2 点样展开 如点样带太宽如何处理？ 影响展开的因素有: 相对湿度的影响; 溶剂蒸汽的影响; 温度的影响; 展距的影响 （2）展开 7.1.2.2 点样展开 边缘效应？ 化合物的极性、吸附剂的活度及展开剂的极性配合： （3）色谱条件的选择 中等活性 中等极性 中等极性物质 较低活性 强极性 强极性物质 高活性 非极性 非极性物质 吸附剂 展开剂 待分离体系 7.1.2.2 点样展开 展开剂选择的原则： （3）色谱条件的选择 7.1.2.2 点样展开 ＊ 宜用挥发性有机溶剂作样品溶剂 ＊ 尽可能用展开剂或与其相近的溶剂作样品溶剂 ＊在同一板上分离若干样品时，所用溶剂应一致 以加快点样速度 以使样品均匀展开 以免相互干扰 ◆ 经常被用于PTLC的溶剂系统： ◆ 通过采用多次展开的方法可以提高PTLC的分离效果 正己烷一乙酸乙酯， 正己烷--丙酮 氯仿一甲醇 （3）色谱条件的选择 7.1.2.2 点样展开 （4）显色 7.1.2.2 点样展开 ①荧光样品 ②荧光背景 ①喷射显色 ②蒸气显色 ③硫酸显色 物理显色法： 生化显色法: 化学显色法： （5）样品的收集 7.1.3 加压制备薄层色谱法(OPLC) OPLC在天然产物分离中的一些应用如下： 蒽醌类化合物:如从鼠李科植物欧鼠李（Rhamnus frangula）中分离大黄素。 呋喃香豆素类化合物:如从伞形科植物（Heracleum sphondylium） 中分离甲氧基呋喃香豆素和从伞形科植物沼地前胡（Peucedanum palustre）中分离呋喃香豆素。 裂环环烯醚萜苷类化合物: 如从龙胆科植物紫龙胆（Gentiana Purpurea）中分得的amaropanin。 7.1.3 加压制备薄层色谱法(OPLC) 苦龙胆脂苷(amarogentin)、苦当药脂苷(amaroswerin)及龙胆苦苷(gentiopicrin)。 倍半萜类化合物 Fullas等(1989)使用正相薄层色谱板。以己烷一乙酸乙酯(10：3)为流动相，对lOOmg合成的hernandulcin(一具有强烈甜味的倍半萜)进行了纯化，除去了其中少量的反应副产物。 二萜类化合物 如从巴豆油中分离巴豆醇(phorbol)，二酯类化合物(Erdelmeier等，1988)。 葫芦苦素类化合物 分自葫芦科植物巨花雪胆(Hemsleya gigantha)(Yang等，1988)。 甾体皂苷类