RSAP分子记技术.docVIP

目录 摘要 1 Abstract 1 1 引言 2 1.1 RSAP标记技术 2 1.2 DNA提取方法 2 1.3 PCR反应原理及成分 3 2 材料与方法 4 2.1 材料 4 2.1.1 32个花生品种 4 2.1.2 主要试剂 5 2.1.3 主要仪器用具 5 2.2方法 5 2.2.1花生DNA的提取 5 2.2.2 PCR反应体系的优化 6 2.2.3 PCR反应条件中退火温度的确定 6 2.2.4引物初步筛选 7 2.2.5多样性检测 7 3 结果及分析 8 3.1 PCR反应体系的优化 8 3.1.1 引物浓度对扩增结果的影响 8 3.1.2 模板浓度对扩增结果的影响 8 3.1.3 TaqDNA聚合酶浓度对扩增结果的影响 9 3.1.4 dNTPs浓度对扩增结果的影响 9 3.2 退火温度对扩增结果的影响 10 3.3引物筛选结果 11 3.4多样性初步分析 11 4讨论 12 4.1 RSAP特点 12 4.2 影响RSAP因素 13 致谢 14 参考文献 15 RSAP标记技术在花生遗传多样性检测中的初步应用 生物技术专业 李鹏飞 指导教师 乔利仙 摘要：限制性位点扩增多态性(restriction site amplification polymorphism ,RSAP) 是根据基因组内普遍存在的酶切位点来设计特殊的引物,通过简单的梯度PCR反应来产生多态性。本研究首次建立了适合于花生RSAP分析的PCR反应体系和反应条件, 并对RSAP标记技术在花生遗传多样性检测中的应用进行了初步研究。利用所建立的体系，使用15对引物对32个花生DNA进行了PCR扩增,经过重复验证,有8对引物能够扩增出清晰且稳定的条带，这些条带具有一定的多态性，说明所建立的体系可用于花生遗传多样性分析。 关键词：RSAP；花生；遗传多样性 The Application of RSAP Marker Technique in Diversity Detection of peanut Student majoring in biotechnology Li Pengfei Tutor Qiao Lixian Abstract : Restriction site amplified polymorphism (RSAP) requires just a simple polymerase chain reaction(PCR)to generate polymorphic markers around restrictive site. An RSAP analytic system suit for peanut was set up and applied in diversity detection of peanut for the fist time. In this experiment, fifteen primer pairs were screened with 32 peanut varies by the RSAP analytic system; and eight of them produced stable and reproducible amplification patterns. Some of the fragments screened by the primer pairs were polymorphic, indicting that the analytic system was suit for the diversity detection of peanut. Key words: RSAP; peanut; diversity 1 引言 花生是世界范围内广泛种植的重要油料作物之一，营养价值高，用途广，深受人们喜爱。中国花生世界年产量居世界第一位（万书波，2003）。随着中国加入世贸组织和现代交流的国际化，选育更加高产，高油，抗逆性强，早熟或其他专用型花生品种变得尤为重要（王传堂，1999）。传统的育种方式存在周期性长，对隐性基因控制的性状不易筛选等局限性，而我国对花生在分子生物学方面的研究还相对落后于其他作物（孙大容，1998）。因此，探索花生基因组研究方法对于花生遗传育种研究和加速野生种的利用有其重要意义，RSAP作为一种新型的分子标记技术，简便且具有潜力。 1.1 RSAP标记技术 RSAP ( restriction site amplification polymorphism)即限制性位点扩增多态性,是通过简单的梯度PC