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高 效 液 相 色 谱 我国药典（二部）收载高效液相色谱法数量（按品种计）比较表： 数量按品种计算 1985年版 1990年版 1995年版 2000年版 2005年版 8 56 121 279 848 鉴于HPLC应用在药品分析中应用越来越广泛，因此每一个药品分析人员应熟练应用HPLC。 I．概论 一、液相色谱理论发展简况 液相色谱实际是一种分离方法，就象以前所用的萃取、蒸馏、离心、过滤等等一样。其分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。 色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时采用的实验方法。他将植物色素的石油醚提取液倒入装有碳酸钙的直立玻璃管,再加入石油醚使其自由流下,结果色素中各组份互相分离形成各种不同颜色的谱带（Tswett）用希腊语chroma(色)和graphos(谱)描述他的实验方法，即现在的Chromatography(色谱法)，色谱法(Chromatography)因之得名。 色谱法自20世纪30年代开始广泛研究，发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法，而高压液相色谱法的广泛应用则到20世纪70年代。 液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。也称现代液相色谱。 介绍《超高效液相色谱（UPLC）的应用HPLC的特点 适用范围宽：现在大部分化学类药品皆可采用该仪器分析。 分离效率高：复方分析、辅料干扰时等情况下，更显示其威力。 速度快：一般出峰时间在30min以内。这里需要强调的是，通常采用流速为1.0ml/min，柱温30~40的测定条件。一般含量测定、溶出度可调整为出峰时间快一些，有关物质测定一般调整的慢一些，最好10~15min左右出锋为好。 流速和柱温均可适当改变，以适应测定的需要。如含量测定时，可适当加大流速和提高柱温；柱温和流速降低均可对分离效果。顺便提：同样的测定条件，不同公司生产的色谱柱C18柱，出峰时间都有可能相差很大这十分正常。一些特殊的，质量标准中详细注明。国内做不到，但可在色谱条件上下工夫，以适应不同的色谱柱型号，即后面即将讲到的。 灵敏度高：可检测物质达10-9g左右ng级），一般最低检测浓度均可达10-1~10-3μg/ml（进样体积10~20μl）。这是紫外无法匹敌的。有些浓度非常低的，紫外检测不到或者说紫外无法测定的，应用HPLC均可得到满意的！可通过使用检测器 色谱柱可反复使用：一般好，均可达2年以上。流出的组分容易收集：可用于制备色谱或价格极为昂贵的物质收集。 安全：仅一些有机溶剂的污染（使用时，流动相口要密封，一者挥发，流动相中各组分比例不准，二者防止污染环境），比气相要安全的多。 还有一个优点，就是成功率较高：一般条件确定好后，均可得满意的结果，这也是与气相、毛细管电泳比最大的优点。150~300 Kg/cm2。色谱柱每米降压为75 Kg/cm2以上。 高速——流速为0.1~10.0 ml/min。通常分析一个样品在15~30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。 高效——可达50000塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达100种。 高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。 柱子可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。 分辨率高——可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。 样品量少，容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。 缺点：价格昂贵、维护费用高，目前此类仪器绝大部分还依赖进口。 三、色谱法分类 ◎按分离的目的可分为： “分析型液相色谱” “制备型液相色谱” 目的:得到数据-定性及定量分析 得到纯品-分离及纯化 –灵敏度的要求 –化合物的稳定性 –样品的复杂性