小黑豆乳清水中活性成分提取及功能性多肽研究.docVIP

小黑豆乳清水中活性成分的提取及功能性多肽的研究 【摘要】：本文研究了小黑豆乳清水中活性物质的提取；研究了乳清蛋白的提取、精制、最佳水解条件和抗氧化能力；试验探讨小黑豆乳清蛋白和水解多肽对化学性和酒精性肝损伤的保护作用以及水解多肽对皮肤的保湿作用和抗光老化作用,结果如下：1.黄酮与皂甙类物质的提取：提取皂甙和黄酮的最佳条件分别为：乙醇浓度为60%和70%、料液比1：30和1：40、提取时间都为2h、提取温度都为70,在此条件下皂甙平均得率为6.21%,黄酮平均得率为1.84%。2.经测定,小黑豆球蛋白的等电点为pI=4.3;粗提小黑豆乳清干品中总糖(24.33%)和灰分(37.84%)含量最高,蛋白(17.81%)含量次之。小黑豆乳清蛋白的SDS电泳图谱中主要有七条带,所对应的分子量依次为101.8kDa,62.4KD,61.8KD,25.3kDa,20.1kDa,18.4kDa,8.0kDa,其中分子量为20.1kDa的胰蛋白酶抑制剂含量较高3.乳清蛋白精制：经过絮凝→除糖→微滤→超滤→真空干燥这一系列操作后,乳清蛋白的纯度可达70%以上。4.用不同的蛋白酶在最合适的条件下水解乳清蛋白,结果表明：用细菌酸性蛋白酶在加酶量为1500U/g蛋白、pH为3的条件下于40恒温水解4h效果最好,其多肽得率高达91.153%；用细菌酸性蛋白酶进行水解条件的优化,最佳水解条件为pH=2、加酶量2000U/g蛋白、于45下水解4h,此条件下多肽的总抗氧化能力(0.835mg/mL)最强；电泳分析结果表明,用细菌酸性蛋白酶水解所得多肽的分子量分布较集中,80%分子量都在1000Da以下。5.将小黑豆乳清蛋白和水解多肽分别灌胃CCl4化学性肝损伤小鼠模型和酒精性肝损伤小鼠模型,结果表明,小黑豆乳清蛋白和多肽均对两种肝损伤具有保护作用。6.皮肤保湿试验表明,15%的小黑豆乳清多肽具有较好的皮肤保湿作用,并可以明显降低皮肤组织中MDA含量、提高HYP含量和CAT活力,具有抗皮肤光老化能力。【关键词】：小黑豆乳清蛋白乳清多肽肝损伤光老化 【学位授予单位】：山西大学 【学位级别】：硕士 【学位授予年份】：2013 【分类号】：TS201.2 【目录】：中文摘要13-14ABSTRACT14-16第一章绪论16-221.1小黑豆概述16-171.1.1小黑豆资源分布及其特征161.1.2小黑豆的营养成分及应用价值16-171.2豆类乳清的研究现状17-201.2.1豆类乳清有效成分的分析与研究17-181.2.2豆类乳清蛋白与分离蛋白的组成及差异18-191.2.3豆类乳清蛋白的加工利用情况191.2.4豆类乳清的研究进展19-201.3本研究的意义及主要内容、技术路线20-221.3.1研究意义201.3.2主要内容20-211.3.3技术路线21-22第二章小黑豆乳清水中黄酮和皂甙类物质的提取与分析22-282.1前言222.2试验材料与仪器222.2.1试剂与材料222.2.2仪器与设备222.3试验方法22-232.3.1小黑豆乳清水的制备222.3.2皂甙与黄酮含量的测定方法22-232.3.3皂甙与黄酮类物质的提取分离方法及试验设计232.4结果与讨论23-272.4.1小黑豆乳清中皂甙与黄酮类物质的结构表征23-242.4.2皂甙提取分离的试验结果与分析24-262.4.3黄酮提取分离的试验结果与分析26-272.5本章小结27-28第三章小黑豆乳清蛋白的提取及其水解多肽的研究28-393.1前言283.2试验材料与仪器283.2.1试剂与材料283.2.2仪器与设备283.3试验方法28-323.3.1小黑豆乳清中主要营养成分的测定方法28-293.3.2小黑豆乳清蛋白的提取方法293.3.3小黑豆乳清蛋白的精制及其分子量和氨基酸的分析29-313.3.4小黑豆乳清多肽的酶解试验方法313.3.5水解多肽的分析方法31-323.4结果与分析32-383.4.1小黑豆乳清中主要营养成分含量323.4.2小黑豆乳清蛋白的精制步骤对几种主要成分含量的影响32-333.4.3小黑豆乳清蛋白的分子量分布和氨基酸组成33-353.4.4几种酶解小黑豆乳清多肽的分子量分布分析35-383.5本章小结38-39第四章不同酶解乳清多肽的体外抗氧化能力的分析与筛选39-454.1前言394.2试验材料与仪器39-404.2.1试剂与材料394.2.2仪器与设备39-404.3体外抗氧化试验方法40-414.3.1清除O_2~-·的研究方法404.3.2清除·OH的研究方法404.3.3总抗氧化能力的测定方法40-414.3.4水解方案的筛选方法414.4结果与讨论41-444.4.1不同酶解乳清多肽清除自由基的能力比较41-424.4.2细菌酸性蛋白酶清除自由