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SDS凝胶电泳 姓名：杨文骏 学号：S1309008 * SDS凝胶电泳简介及应用 SDS凝胶电泳的实验步骤 注意事项 主要内容 * 聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在加速剂和催化剂作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶。以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE) * 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳时，它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。 如果在丙烯酰胺凝胶系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(SDS)，则蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量，而与所带电荷和形状无关。 因此可以利用SDS测定蛋白质分子量。 SDS* 凝胶由分离胶和浓缩胶组成： 上层为浓缩胶，凝胶孔径较大，没有分子筛效应，其pH为6.8，由于快慢离子所形成的高电压梯度，使得变性蛋白质分子在泳动中被压缩为很薄的一层，大大提高了分辨率。 下层为分离胶，凝胶孔径较小，有分子筛效应，pH为8.8，变性蛋白质分子所带负电荷基本一致，泳动速度主要决定于分子量。 * * 1. 安装制胶模具。 2. 调制分离胶，立即灌注至模具高度的70% 。 3. 加一层纯水，约30min后聚合。 4. 倒出水并用滤纸把剩余的水分吸干。 5.调制浓缩胶，立即灌注插入梳子。静置。 实验步骤 * 6. 样品及标准品的准备：标准品按说明书进行处理，样品加入ddH2O溶解后，再加入SDS上样缓冲液。 7. 加样电泳（每孔加样15μl）。 8. 卸下玻板，剥离凝胶放在器皿内，切去一角作为方位标记。 9. 染色：用至少五倍体积染色液浸泡凝胶，于平缓摇摆平台上室温1h左右。 10.脱色：用蒸馏水漂洗数次，再用脱色液脱色，至蛋白质条带清晰 * * * * * （1）聚丙烯酰胺具有神经毒性，操作时要戴手套。 （2）安装电泳槽时要注意均匀用力旋紧固定螺丝，防止夹坏玻璃板，避免缓冲液渗漏。 （3）梳子需一次平稳插入,梳口处不得有气泡,梳底需水平。 注意事项 * （4）微量注射器（加样器）上样时, 注射器不可过低,以防刺破胶体；也不可过高, 样品下沉时易发生扩散，溢出加样孔。 （5）剥胶时要小心,保持胶完好无损,染色要充分。 *