病毒的纯化与保存分析.pptVIP

病毒的纯化和保存 病毒纯化目的(了解) 为了了解病毒的结构、传染与免疫、遗传与变异等性质，常常需要高纯度的病毒 病毒纯化原理(熟悉) 利用物理或化学的方法尽可能地去除宿主细胞中的组分，将病毒从其宿主细胞内提纯出来，在纯化过程中保持病毒的生物活性和感染性。 病毒纯化的一般原则(熟悉) 1、释放病毒到胞外 1.1 容易释放病毒(培养液/尿囊液) 1.2 不容易释放病毒(细胞破碎) 2、去除细胞碎块 低速离心，以2000～6000r/min离心30～40分钟，可除去90％以上的细胞碎片和杂质 3、病毒悬液浓缩 细胞破碎方法(熟悉) 超声破碎：密集的小气泡迅速炸裂，破坏细胞 高压匀浆：机械切割力 高速珠磨：玻璃小珠、石英砂、氧化铝等研磨剂 酶溶法：溶菌酶、蛋白酶、葡聚糖酶 化学渗透：渗透压改变使细胞破裂 反复冻融：形成冰晶，使细胞膨胀破裂 病毒纯化方法聚乙二醇(PEG)浓缩法 PEG是环氧乙烷和水缩合而成的水溶性非离子聚合物，无毒、无刺激性。 平均分子量不同，性质也有差异。分子量200～600者常温下是无色无臭粘稠液体，分子量在600以上者就逐渐变为半固体状、蜡状固体。 随着分子量的增大，其吸湿能力相应降低。 不同分子量PEG性质比较 聚乙二醇(PEG)浓缩法(掌握) 分子量2000～6000的PEG用于病毒浓缩