免疫学实验论文讲义.doc

抗血清的制备以及抗体效价的检测 Preparation of Antiserum and Titer Detection of Antibody 摘要：通过使用待测抗原免疫健康小白鼠与兔子。经过3-4周饲养后，从使用待测抗原免疫过的小白鼠和兔子体内分离出抗血清。测定得到的抗体效价。 概述方法：使用实验提供的抗原BSA免疫兔子，抗原3678免疫小白鼠。初次免疫反应（二次免疫由其他专业代做）6周后抽血。通过仪器分离出抗血清。使用间接ELISA方法检测抗体效价。与对照组（来自于同实验其他组同学）进行对照。计算出抗体效价。 Abstract:?To immunize?healthy mice?and?rabbits?tested by using the?antigen. After?6 weeks of?feeding,?separating?antiserum?from the use of?measured?antigen immune?of?mice and?rabbits.?And then determine titer of?antibody. Summary:?Immunize the rabbit with antigen of BSA ,the mouse with antigen of 3678.This is primary immune response?(secondary immune response made?by students of other major)?.After 6 weeks,?collect blood from rabbits and mice. Separate?antiserum from blood through the instrument. And then determine titer of?antibody by indirect ELISA.? Finally calculate the titer of antibody by comparison from the other group of students 关键词：抗血清（Antiserum）抗体效价（Titer of antibody）间接Elisa法（Indirect ELISA） 引言:用实验室老师提供的特定抗原对小鼠和白兔进行初次免疫，之后对小鼠和白兔进行饲养，其中穿插再次免疫，6周后对小鼠和白兔抽血，分离出抗血清，再利用间接ELISA（酶联免疫吸附试验）对抗血清中的抗体进行效价分析，最后计算得出结论。使用抗原免疫动物的方法，从动物体内分离出高效价的抗血清。然后通过分离纯化得到人类需要的抗体用于治疗疾病、医学研究等领域。兔子，小白鼠等动物广泛应用于免疫学研究。 实验原理： 本实验使用的免疫动物是白兔和小白鼠，用具有抗原性的物质注入到健康动物的机体后，将引起免疫应答，并会形成浆细胞，分泌抗体。抗体主要存在于血清中，经多次免疫，使血清中的抗体量达到要求浓度，然后采集动物血液，再从血液中分离析出血清，从而获得抗血清。 使用间接ELISA方法测定抗体效价。ELISA（酶联免疫吸附测定）是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。ELISA过程包括抗原(抗体)包被在固相载体上，加待测抗体(抗原), 再加相应酶标记抗体(抗原)，生成抗原(抗体)--待测抗体(抗原)--酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。借助分光光度计的光吸收计算抗体(抗原)的量。间接ELISA的原理是将已知抗原吸附于固相载体，酶标记二抗检测液相中未知抗体。 2.实验材料：适龄、健壮的家兔和小白鼠，注射器，BSA抗原，3678抗原，3％～5％苦味酸溶液，棉签，离心管，基因枪，包被液等。 3.实验方法： （1）小鼠及家兔的免疫：选取健康适龄的试验用小白鼠与小白兔，分别用苦味酸做上记号，要求记号的面积不可过大，对实验动物的正常生存不能有不利影响 家兔：将200ug抗原蛋白BSA与等量佐剂混合，震荡均与后采用肌肉注射的方法从小白兔的大腿注入小白兔体内。 小鼠：小鼠腹腔注射，以左手抓住动物，使腹部向上，右手将注射针头于左（或右）下腹部刺入皮下，使针头向前推?0.5～1.0cm，再以45度角穿过腹肌，固定针头，缓缓注入药液，为避免伤及内脏，可使动物处于头低位，使内脏移向上腹。将20ug抗原蛋白3678与等量佐剂混合，震荡均匀后采用腹腔注射的方法注射到小白鼠体内； （2）抽血、放血、分离抗血清： 家兔：心脏抽血，家兔固定（仰卧）---准确找到心脏部位---剪毛（心脏部位）---消毒---进针（50ml注射器接带硅胶管的12号针头）抽血，抽至50ml，从硅胶管接头处取下注射器，拔针头，将血液注入100ml无菌空三角瓶，再重复上