07 免疫组化的特异性与敏感性2讲解.pptVIP

* 第七章. 免疫组化的特异性与敏感性 (The specificity and sensitivity of Immunohistochemistry) I. 特异性 II. 特异性与非特异性染色 III. 对照试验 IV. 提高敏感性的方法 I. 特异性 A. 方法特异性: 说明染色结果是由免疫组化反应引起的. B. 血清特异性: 说明染色结果指由免疫组化中的抗原抗体反应引起, 同时要排除交叉反应. II. 特异性与非特异性染色 A. 特异性染色: 由一抗与待检抗原发生特异性免疫反应而产生的染色. 新发现的阳性结果需多次多方法重复实验证实. B. 非特异性染色: 由组织细胞中非抗原-抗体反应引起的染色, 常无结构基础并弥漫存在, 或多次染色的结果相互矛盾. 常见于组织切片的边缘 (边缘效应)或人工损伤部位. III. 对照试验 A. 阳性对照: 证明染色方法和试剂的有效性. B. 阴性对照: 必不可少, 证明染色结果的有效性. 如出现阳性即为假阳性. 1. 空白试验: 用稀释抗体的缓冲液(PBS, TBS等)替代一抗. 2. 替代试验: 用相同稀释度的NGS(与制备一抗的动物种属相同)代替一抗. 使用多克隆抗体时, 阴性对照必须采用替代实验. 3. 阻滞试验: 先用过量的未标记特异性抗体再用标记特异性抗体孵育组织. 4. 吸收试验: 用过量特异性抗原