细胞工程学第分析.pptVIP

人工种皮 人工种皮指包裹在最外层的胶质化合物薄膜，要求其能够允许内外气体交换畅通，防止人工胚乳中的水分和各种营养物质的渗漏，并具有一定的机械抗压性。人工种皮上没有种脐、种孔等结构。 三、人工种子的制造过程 1、培养大量体细胞胚 （1）要求人工种子体细胞胚与天然种子有相当的成株率甚至超过天然种子，因此培养出高质量的体细胞胚是制备人工种子最重要的技术关键。 （2）掌握影响胚状体发生和发育的条件：植物激素、氮素、氨基酸、天然提取物、活性炭等。 （3）要控制胚状体的同步生长： 先使DNA合成停止,抑制细胞分裂,再使细胞进入同步分裂。 2、人工胚乳的制作 体细胞胚的包裹关系到人工种子的萌发和生产应用成败。包裹物要不影响体细胞胚的萌发，并提供其萌发与成苗所需的养分和能量，即起到胚乳的作用。 人工胚乳的制作 人工胚乳提供胚状体新陈代谢和生长发育的营养物质及生长素等。人工胚乳的制作实质上是筛选出适合该体细胞胚萌发的培养基配方,最后将筛选出的培养基添加到包埋介质中。 人工胚乳的培养基 人工胚乳的培养基中应该有这种植物生长发育所必需的营养物质、生长发育控制因子及其他化学或生物因子，以满足体细胞胚能顺利发展成植物的全部需要，此外还需加适当的杀虫剂和杀菌剂，因为人工种子种植、发芽或发育过程中可能比自然种子更易受霉菌、细菌、害虫的侵染。 包埋介质的选择 1、要是能起缓冲作用的亲水胶体，但同时又是在体细胞胚发芽时能穿透的物质。 2、应有足够的硬度以保证人工种子在生产、运输和种植过程中的安全，同时又要保持人工种子良好的生活力和发芽率。 用海藻酸钠可作包埋介质的基本成分（人工胚乳）：将成熟的健康体细胞胚与2%-3%的海藻酸钠混合（混合前海藻酸钠已加入必要成分），然后将含一个个体细胞胚的海藻酸钠小滴一一加到适当浓度的CaCl2中，经胶复合作用的造型过程，便可在20-30分钟左右形成形似鱼肝油丸大小的有一定硬度的成型雏形人工种子。 3、装配人工种皮 人工种皮的要求： 1、有一定密闭性，以保持人工胚乳的各种成分不易流失，又要有适当的透气性，以利于气体的交流。 2、既要有一定的坚硬度，起到对体细胞胚的保护作用，加强其耐储力和对各种机械作用的抵抗力，以利于储存、运输，又要在人工种子萌发时，能让体细胞胚顺利发芽，也就是要软硬适中。 3、人工种皮本身应对体细胞胚及幼苗无毒，最好兼有一定的杀伤病虫害的作用，还要求装配简单，成本也不宜太高。 人工种子的制造程序大致包括： 1、外植体的选择和消毒； 2、愈伤组织的诱导； 3、体细胞胚的诱导； 4、体细胞胚的同步化； 5、体细胞胚的分选； 6、体细胞胚的包裹(人工胚乳)； 7、包裹外膜（人工种皮）； 8、发芽成苗试验； 9、体细胞胚变异程度与农艺研究。 四、人工种子的优点 1、繁殖速度快 2、遗传变异问题少 3、大大缩短育种周期，加速良种繁育 速度 4、具备一些天然种子不具备的功能 5、便于贮存和运输，适合机械化播种 4．可获得含有特种宝贵基因的植株。 5．可人为地影响控制作物生长发育和抗性。 6．节约粮食。 7．可以保存及快速繁殖脱病毒苗。 8．体积小，占用空间小，不受环境因素制约，可一年四季进行人工种子工厂化生产。 四、单细胞制备方法 1、机械法 2、酶法 3、愈伤组织诱导法 五、单细胞培养方法 1、平板培养法 （1）单细胞悬浮液的制备，并计数。 （2）调节细胞密度。 （3）培养基选择与凝固基选择，浇平板。 （4）接种培养。 2、看护培养与饲养层培养法 看护培养：用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，使其持续分裂和增殖的一种培养方法。 优 点：简便、成功率高。 缺 点：不能在显微镜下直接观察。 3、液体浅层静置培养法 优 点：易于补加新鲜培养基、可以镜检。 4、细胞悬浮培养法 优 点： （1）能大量提供比较均匀的细胞。 （2）细胞营养吸收、环境条件好，细胞增殖快。 （3）适合大规模培养，生产有价值的活性代谢产物。 六、细胞的保存 1、继代培养保存法 2、低温保存法 -20度保存 3、冰冻保存 液氮保存 七、细胞培养技术的优点 1、代谢产物的生产是在控制条件下进行的。不仅节约能源，减少耕地占用面积，降低成本，而且不受地理、季节、地域和气候条件的限制。生产周期短，可大大提高经济效益。 2、细胞培养是在无菌条件下进行的，可以排除病菌和害虫的影响。可代替整体植株在工厂内连续生产所需产物。 3、可通过添加抑制剂等使生物合成按照人们的设计进行；可以通过特定的生物转化途径获得均一的有效成分。 4、可通过诱变筛选，获得高产细胞株，可以探索新的合成路线，并且可以进行特定的生物转化获得