基于PCR方法的HPV检测方法和在宫颈癌应用中劣势材料.pptVIP

PCR的限制条件 临床验证 抑制、竞争 敏感度 L1段缺失 可重复性 HPV 16 HPV 18 HPV 31 HPV33 HPV 35 HPV 52 HPV 58 GP5+ / 6+ MY09 / 11 PGMY09 /11 Ranking of HPV types in 120 cancers in Hong Kong P.Chan et al, Int J Cancer. 2005 Jul 19 香港的HPV分型研究 使用了不同引物检测HPV，发现使用GP5+/6+，MY09/11和PGMY09/11对HPV16和18型的检出率敏感度差异不大，但HPV52型差异却非常大，使用GP5+/6+ 几乎无法检测出HPV52型。 不同引物对不同亚型的检出率不同。 重申：为什么HC2是最佳的HPV初筛方法? 选择HC2的理由 分析敏感度和临床敏感度 HC2被大量的、全球多中心临床验证数据所支持 临床敏感性是关键 检测技术简便可靠、适用于高通量样本 无需DNA提取 RCS自动化系统可同时批量检测4 x 96样本 与PCR不同…… 没有竞争性抑制 大多数PCR检测会因为目标片段的缺失而受到影响 晚期癌症阶段L1缺失  Questions or comments ? ! * * * * A Workshop - * - For Internal Use Only Sample Assay Technologies For Internal Use Only 主要内容 HPV检测面临的挑战以及为何选择HC2用于子宫颈癌筛查 基于PCR的HPV检测方法介绍及其用于子宫颈癌筛查中的局限性（对比HC2） HPV检测面临的挑战 有超过150种的HPV型别 有些型别引起癌症 13+高危型致癌HPV，单一感染或多重感染 有些引起轻度病变，如疣 HPV感染引起的疾病因年龄和地域不同 多重感染较为普遍 RT-PCR研究发现，在107例液基细胞学结果为各种子宫颈上皮内瘤病变的样本中，有52％存在多重感染 (Lindh et al., J Clin Virol. 40(4):321-4. ( 2007) 子宫颈癌 癌症发生的部位可能会比较隐匿难以发现、在子宫颈内口（转化区） 由于远离子宫颈外口，因此采样时可能很难被采到 采样部位非常重要 众多的其它微生物（交叉反应） 个人卫生、生理周期可能会对检测有抑制 HPV检测方法用于子宫颈癌筛查特点 HPV检测用于临床子宫颈癌筛查，目的不是简单地检测有无HPV感染的问题，而是发现那些有HPV感染并且存在发展成癌前病变或癌的高风险妇女。 子宫颈癌筛查强调的是临床敏感度而不是分析敏感度 PCR是一种很好的方法，用于分子病毒检测，分析灵敏度很高，10个拷贝数量级的水平都能把病毒检测出来 用于子宫颈癌筛查中的HPV检测方法要求：该检测方法要有很好的临床敏感度，即癌前病变或癌的发病风险，而不是分析敏感度 为何选择HC2技术用于子宫颈癌的筛查 HC2是最佳的HPV筛查工具  检测方法简便、可靠 不易被污染物所抑制 不需要前期的DNA提取过程 缩减劳动成本和试验时间 在同一反应中检测多种型别病毒 反应简单、易于操作 与PCR不同的是，不需要专业高清洁实验室以避免交叉污染 不会因目标DNA的数量而对结果有影响 测出5000个病毒拷贝 可批量、全自动处理 (RCS platform; NextGen) 主要内容 HPV检测面临的挑战以及为何选择HC2用于子宫颈癌筛查 基于PCR的HPV检测方法介绍及其用于子宫颈癌筛查中的局限性（对比HC2） What’s The Best Analytical Sensitivity Cutoff For Clinically Useful HPV DNA TestingHPV病毒含量与临床病变的关系 Adapted from Snijders et al. Journal of Pathology 2003; 201:1-6 由此可见：HC2的分析阈值及判断标准是经过临床验证的 由此可见：基于PCR的HPV检测方法检测到许多与临床无关的HPV感染 Snijders et al. Journal of Pathology 2003; 201:1-6 高度分析敏感度 检测出无临床相关性的病毒水平 一过性感染 恢复阶段：免疫反应 早期感染、可自体清除 “…使用分析敏感度过高的检测方法会降低临床特异性” PCR关注的是分析敏感度，但真正重要的是临床敏感度 PCR分析敏感度为 10 copies HPV DNA HC2临床敏感度是5,000 copies HPV DNA Adapted from Snijders et al. Journal o