哮喘患者肺部γδT淋巴细胞的变化与对气道炎症的影响.pdf

FCS fetalcalfserum 胎牛血清 DMSo dimethylsulphoxide 二甲基亚砜 PBS buffersaline 磷酸盐缓冲液 phosphate BCG bacille 卡介苗 calmette-guerin HSP heatshock protein 热休克蛋白 LPS 脂多糖 lipopolysaccharide VCAM．1vascularcelladhesionmolecule 血管细胞粘附分子l 一1 67 第一部分哮喘患者肺部丫6T淋巴细胞比例和增殖活性的变化 摘要 目的l、探讨哮喘患者肺部76T淋巴细胞数量的变化。 2、探讨哮喘患者肺部yST淋巴细胞增殖活性的变化。 3、评估磁性细胞分选器(MACS)纯化支气管肺泡灌洗液中丫6T淋巴细 胞的效果。 方法1、收集哮喘和对照患者的支气管肺泡灌洗液。 2、显微镜下观察支气管肺泡灌洗液中的细胞密度。 3、对支气管肺泡灌洗液中的细胞进行分类计数。 4、利用流式细胞术检测支气管肺泡灌洗液中俩T细胞的比例。 5、用磁性细胞分选器纯化支气管肺泡灌洗液中的TST淋巴细胞。 6、通过台盼兰染色、荧光显微镜和流式细胞术来评估MACS纯化支气管 肺泡灌洗液中俩T淋巴细胞的效果。 7、对纯化的俩T淋巴细胞进行体外培养，通过MTT比色法检测yST淋 巴细胞的增殖活性。 结果 1、在纯化细胞之前，对支气管肺泡灌洗液中的细胞进行计数，哮喘患者 组支气管肺泡灌洗液中的细胞密度为(22．5±4．5)X104个／毫升，高 于对照组的(18．8±3．7)．x104个／毫升，差异不显著(t=-I．665、P0．05)。 2、显微镜下对细胞进行分类计数，哮喘组的巨噬细胞比例为(81±4) 哮喘组的淋巴细胞比例为(15±3)％，高于对照组的(13±2)％， 但无统计学差异(t=1．490、P0．05)；哮喘组嗜酸性粒细胞的比例(3 ％)高于对照组(1％)；而中性粒细胞的比例(1％)也略高于对照 组(1％)。 3、流式细胞术检测表明，哮喘患者组支气管肺泡灌洗液中Y6T淋巴细胞 显著(t=-12．449、P0．01)。 4、MACS纯化支气管肺泡灌洗液中的丫6T淋巴细胞后，在荧光显微镜下 3 观察，lrST细胞的比例明显增加，其它细胞基本消失。流式细胞术检测 表明，76T淋巴细胞的比例93％。台盼兰染色表明，细胞存活率95 ％。 5、MTr法检测yST淋巴细胞的增殖活性，哮喘患者组的OD值为0．201 P0．05)。 结论l、哮喘患者肺部俩T淋巴细胞的比例明显升高。 2、哮喘患者肺部市T淋巴细胞的增殖活性显著增强。 3、MACS可以有效地纯化支气管肺泡灌洗液中的tST淋巴细胞，且不会 对tST淋巴细胞造成明显损伤。 关键词 支气管哮喘；俩T淋巴细胞；支气管肺泡灌洗； 4 Abstract Object