实验二酪蛋白的制备.docVIP

【《应用生物制药技术》实验指导】 实验二 酪蛋白的制备 一、实验目的 熟悉学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。 二、实验原理 牛乳中主要蛋白质是酪蛋白，含量35g/L，酪蛋白是一些含磷蛋白的混合物，pI值为4.7。利用等电点时溶解度最低原理，将牛乳的pH调至4.7，酪蛋白沉淀下来，再用乙醇和乙醚洗涤沉淀除去脂类杂质可得纯的酪蛋白。 附：酪蛋白介绍 酪蛋白是哺乳动物包括母牛，羊和人奶中的主要蛋白质。牛奶的蛋白质，主要以酪蛋白(Casein)为主，人奶以白蛋白为主。酪蛋白是一种大型、坚硬、致密、极困难消化分解的凝乳(curds)。 　　酪蛋白是乳中含量最高的蛋白质，目前主要作为食品原料或微生物培养基使用，利用蛋白质酶促水解技术制得的酪蛋白磷酸肽具有防止矿物质流失、预防龋齿，防治骨质疏松与佝偻病，促进动物体外受精，调节血压，治疗缺铁性贫血、缺镁性神经炎等多种生理功效，尤其是其促进常量元素（Ca、Mg）与微量元素（Fe、Zn、Cu、Cr、Ni、Co、Mn、Se）高效吸收的功能特性使其具有“矿物质载体”的美誉，它可以和金属离子，特别是钙离子结合形成可溶性复合物，一方面有效避免了钙在小肠中性或微碱性环境中形成沉淀，另一方面还可在没有VD参与的条件下使钙被肠壁细胞吸收，所以CPPs是最有效的促钙吸收因子之一，它的发现为补钙制品的研发提供了一种新方法。目前，CPPs已被公认为国内外研究最多、最深入，应用领域极为广泛，且极具开发价值的一类分子结构与生物功能间有明确对应关系的活性多肽物质。 酪蛋白为非结晶、非吸潮性物质，常温下在水中可溶解0.8-1.2%，微溶于25℃水和有机溶剂，溶于稀碱和浓酸中，能吸收水分，当浸入水中则迅速膨胀，但分子不结合。40℃预热 ）。 2、试剂 （1）95%乙醇 （2）无水乙醚 （3）pH4.7 HAC-NaAC 缓冲液 （ 40℃预热 ） （4）乙醇-乙醚混合液（V/V=1/1） 3、主要仪器设备 （1） 离心机， 天平，滤纸（Φ=9cm），表面皿 （2）抽滤装置（布氏漏斗，抽滤瓶，圆形抽滤管，橡皮塞） （3）水浴锅 （4） 通风柜 四、实验步骤 （1） 各小组按以下步骤需要的量配制pH4.7 HAC-NaAC 缓冲液（83g无水NaAc溶于水加60mL冰HAc，稀释至1L-乙醚混合液（V/V=1/1）。 （2）将牛奶和pH4.7 HAC-NaAC 缓冲液预加热至40℃。 （3）用离心管取50mL的牛奶再缓缓加入50mL的pH4.7 HAC-NaAC 缓冲液，不时搅拌均匀，将悬浮液冷至室温，离心，3500r/min，15min，弃上清，得酪蛋白粗制品。 （4）用蒸馏水洗沉淀（不要搅散）3次，再次离心，3000r/min，10min，弃上清。 （5）在沉淀中加入约20mL 95%乙醇，搅拌片刻，将悬浊液全部转移到布氏漏斗中抽滤。用乙醇-乙醚混合液洗沉淀2次，最后用无水乙醚洗沉淀2次，抽干。 （6）将沉淀摊开在表面皿上，风干（或烘干），得酪蛋白纯品。 （7）称量，计算含量和得率。 注：含量： 酪蛋白 g/100mL牛乳 得率： 测得含量/理论含量×100% （理论含量为 3.5g/100mL牛乳） 五、注意事项 1、牛奶与缓冲液要预热。 2、缓冲液要缓加缓搅。 3、实验环境要保持空气流通，门窗要开。 六、作业 认真完成实验报告。