基因工程的原理与技术(梁刚)2013.6.2.pptVIP

* * 基因工程原理---基本操作步骤 1993年，我国科学家将苏云金芽孢杆菌的杀虫蛋白基因导入棉花细胞，培育出了抗棉铃虫效果明显的棉花新品系 普通棉 抗虫棉 基因工程培育抗虫棉的简要过程 苏云金芽孢杆菌(有抗虫特性) 抗虫基因 与载体DNA拼接 导入 棉花细胞(含抗虫基因) 普通棉花 (无抗虫特性) 棉花植株(有抗虫特性) 切取 植物组织培养技术 思考：棉花植株有抗虫特性说明什么？ 说明抗虫基因已经在棉花细胞中成功表达（合成杀虫蛋白） ①获得目的基因 ②重组DNA的形成 ③重组DNA导入受体细胞（宿主细胞） ④筛选含目的基因的受体细胞 ⑤目的基因的表达 基因工程操作基本步骤 一、获得目的基因 目的基因：我们所需要的基因 ◆获得目的基因的两种办法： 1.目的基因的序列已知：化学方法合成 （或用聚合酶链式反应—PCR技术扩增）P7 2.目的基因的序列未知： 先建立基因文库后从基因文库中找到目的基因 注意：辨析基因文库和基因库！ 化学合成方法：蛋白质中的氨基酸序列，推测相应的信使RNA序列，但推测出的信使RNA序列会有很多种！再逆转录合成目的基因 二、形成重组DNA分子 1.实质：目的基因和载体DNA连接过程 2.载体: 3.工具酶： 限制性核酸内切酶、DNA连接酶 质粒 病毒 细菌病毒 植物病毒 动物病毒 下面以质粒做载体为例说明 4.过程： 以质粒做载体为例 ①用一定的限制性内切酶切割质粒，使 其出现一个切口，露出粘性末端。 CTTAA G AATTC G 二、形成重组DNA分子 ②通常用同一种限制性内切酶切断目的  基因，产生相同的粘性末端。 AATTC CTTAA G G 4.过程： 以质粒做载体为例 二、形成重组DNA分子 ①用一定的限制性内切酶切割质粒，使 其出现一个切口，露出粘性末端。 ③将切下的目的基因插入质粒的切口处， 加适量的DNA连接酶，形成一个重组DNA 分子（重组质粒） ②通常用同一种限制性内切酶切断目的  基因，产生相同的黏性末端。 4.过程： 以质粒做载体为例 二、形成重组DNA分子 ①用一定的限制性内切酶切割质粒，使 其出现一个切口，露出黏性末端。 DNA分子 质粒 通常用同一种限制酶 一个切口 两个切口 两个粘性末端 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子(重组质粒) 目的基因与目的基因结合 质粒与质粒结合 目的基因与质粒结合 有三种情况 目的基因与质粒结合的过程中可能有那些结合情况？ 探讨 二、形成重组DNA分子 三、将重组DNA分子导入受体细胞 1.常用受体细胞 大肠杆菌、枯草杆菌、酵母菌、动植物细胞等 用适当的方法将形成的重组的DNA分子转移到合适的受体细胞中。 基因工程科学家常用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞,最主要原因是 A.结构简单，操作方便 B.繁殖速度快 C.遗传物质含量少，简单 D.性状稳定，变异少 三、将重组DNA分子导入受体细胞 1.常用受体细胞 用适当的方法将形成的重组的DNA分子转移到合适的受体细胞中。 2.导入方法： 感染、渗透、显微注射法等 主要是借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径 3.导入过程： 例:质粒作载体，大肠杆菌作受体细胞 氯化钙 宿主细胞:大肠杆菌 细胞壁的通透性增大 重组质粒进入宿主细胞 目的基因随着宿主细胞的繁殖而复制 三、将重组DNA分子导入受体细胞 四、筛选含有目的基因的受体细胞 ★不是所有的受体细胞都接纳我们所需要的重组 DNA分子，故需筛选。 探讨 大肠杆菌的某种质粒具有四环素抗性基因，这种质粒与目的基因重组后，被导入受体细胞，如何判断（检测）受体细胞是否获得了目的基因？ 思路：根据受体细胞是否具有对四环素的抗性来判断 方法：将导入完成后的受体细胞放在含有四环素的培养液中培养，观察其存活情况！ 五、目的基因的表达 因所有生物共用一套遗传密码 思考：从理论上看，目的基因为什么能在受体细胞内表达并合成与原来一样蛋白质？ *