蒸发光散射检测器资料.ppt

蒸发光散射检测器(ELSD)在药物分析中的应用 ?? 中国药品生物制品检定所 mash@ 概述 HPLC-ELSD测定抗生素含量的方法将被收入2005版中国药典 ELSD可以对所有挥发性低于流动相的物质作出准确检测，而与被检测物质的化学基团关系不大，物理性质类似的物质响应一致，响应值与样品的质量成正比。 ELSD作为一种新型检测器，其理论知识和实践应用仍在不断发展中。 背景 检测器的作用是将色谱柱流出物中样品含量的变化转换为可供观测的信号，通常是转换为电信号，以便自动记录下来进行定性定量分析。 传统检测器分为：通用型检测器和选择性检测器 。 针对传统检测器的局限性，近年来，质谱（MS）和蒸发光散射检测技术（ELSD）被列入高效液相色谱检测技术行列。 主要内容 1 蒸发光散射检测技术 2 响应特性 3 实验条件选择与优化 4 定量计算 5 应用实例 第一部分 蒸发光散射检测技术 蒸发光检测器工作原理 蒸发光检测器构造与操作模式 蒸发光检测器基本特点 蒸发光检测器的应用优势 1.1 蒸发光散射检测器工作原理 检测三步曲示意图 1.2 ELSD构造与操作模式 A型－所有液滴进入漂移管及流动池(又称“无气溶胶分流 No Aerosol Splitting”) B型－部分液滴分流排掉；只有一部分进入漂移管及流动池(“气溶胶分流Aerosol Splitting”) ? A型蒸发光散射检测器示意图 B型蒸发光散射检测器示意图 两种操作模式的应用区别 A型操作模式通常使用比较高的操作温度，较适合于高有机含量和低流速流动相。A型仪器通常灵敏度更高一些。 B型操作模式在较低的操作温度下效果较好。在使用高含水、高流速流动相时，B型ELSD通过分流可以得到相对稳定的基线。 在实际应用中采用何种模式ELSD，取决于样品的性质和实验目的。 1.3 ELSD的基本特点 蒸发光散射检测器的检测结果是一个受多因素影响的综合结果。 仪器设计、化合物性质、实验条件的选择（载气流速、漂移管温度、流动相组成…..） 1.3 ELSD的基本特点 灵敏度 检测限与定量限 稳定性与重现性 线性 1.3.1 灵敏度 灵敏度是指测量响应除以对应的输入量变化 灵敏度实际上就是响应值-浓度（或样品量）关系作出的直线的斜率。 斜率越大则灵敏度越高。 ELSD响应曲线 1.3.2 检测限与定量限 检测限：取信噪比为3，即以噪声的3倍作为最小可检测的信号。 定量限：取信噪比为10，即以噪声的10倍作为最小可准确定量的信号。 某种化合物在ELSD中的检测限并不固定不变，它可能随着实验条件的改变而变化，通常在10～几百ng。 ELSD响应曲线 1.3.3 稳定性与重现性 在常规实验中，以进样精密度反映出来的ELSD稳定性，通常RSD2%。 ELSD重现性通过随行标准曲线能够有效保证。 ELSD可以满足一般定量要求。 1.3.4 线性 线性范围是指灵敏度保持不变时样品的最大用量与最小用量之比。反映在检测器响应曲线上就是保持直线线段的样品量变化范围，即检测器输出信号与样品呈线性关系。 1.3.4 线性 所有的液相色谱检测器都有一定的线性范围，用方程表示为： 当x=1时，为线性响应，但对常用的检测器来说，仅在某一范围内接近于1，实际只要在0.98～1.02范围内，即可认为是线性。 ELSD线性特征 线性不过零点 线性范围较窄 低浓度非线性 1.3.5 ELSD与其它HPLC检测器的比较 1.4 ELSD的应用优势 对无特征紫外吸收或只有紫外末端吸收的大分子有机化合物的检测，显示出极大的优越性。 简化了样品的预处理过程，缩短了分析时间。 基线稳定，样品检测灵敏度高。流动相的蒸发使得ELSD和梯度洗脱相容，可以提高色谱分离的分辨率并缩短分析时间。 1.4 ELSD的应用优势 只需一个标准品就可定量两个或更多的未知品，因此可以通过和内标比较来定量未知化合物。此特性对于组合化学中用组合技术合成的化合物的定量尤其有用。 所选的未知物结构相似而分子量不同，定量准确性更高。 1.4 ELSD的应用优势 UVD：定量未知化合物是很困难的，样品的紫外吸收值往往和代表样品质量的色谱峰大小无关。 ELSD：其响应不依赖于样品的光学特性，代表了样品的组成，检测信号更为直接的代表样品的真实浓度，与样品的质量浓度呈正比，因而能用于测定样品的纯度或检测未知物。 1.4 ELSD的应用优势 ELSD的一些性能指标虽然还不能与某些更成熟HPLC检测器相比，但ELSD的检测原理在某些方面有其独到之处 。 认真分析ELSD的有关特点，合理运用，将不利因素的影响降低到最低程度，提高准确度、