第二章-紫外可见分光光度法-2详解.pptVIP

单一组份测量步骤 ①配制一系列标准浓度的标准液 ②测定物质的吸收光谱，选择最大吸收峰波长λmax 若一个物质有几个吸收峰，如何选择？ a:选择吸收峰较高（A值较大） b:并且其他物质没有吸收的波长 ③在选择的波长下进行定量分析 其方法有：吸光系数法、对照法、标准曲线法 [吸光系数法] 根据A=ELC只要已知ε或E1cm1%值，根据被测得吸光度，可求出被测物的浓度。 E值：从手册或文献中查处 [例] 维生素B12样品25.0mg用H2O溶成1000ml后，盛于1cm吸收池中，在361nm处测得吸收度为0.507 (已知E1cm1% = 207)，求样品中B12的含量。 [对照法] 同一物质，同台仪器 ，同一波长测定，故L、E相等 A标/ A样=c标/ c样 c样= c标A样/ A标 在同样条件下配制标准溶液和样品溶液，在选定波长处分别测量吸光度。 A标= Ec标L A样= Ec样L 缺点：易造成偶然误差，从统计学观点看误差很大。 标准曲线法 1. 方法 2. 标准曲线法优缺点: 3. 回归直线方程 吸收池厚度不变(同吸收池),入射光波长不变,其它条件不变情况下： ①在一定浓度范围内,配制一系列浓度标准溶液 ②分别测定不同浓度下的吸光度A ③作图A-c ④对待测样品测出A,查出c值. 2.标准曲线法优缺点 优点: 克服了吸光系数法、对照法的不足 缺点: 尽管配制一系列标准液作图，有时还会有明显偏差；作图有人为因素引起误差。 如果要求精确测定时，可用回归直线方程计算样品浓度。 back 混合物的定量分析 考虑最简单的a、b两组分混合的定量分析： 对于图形1 混合物有A、B两种组分，在a的吸收峰λ1处， b没有吸收；在b的吸收峰λ2处，a无吸收。 [测定方法] 可分别在λ1、λ2处，用单一组分方法进行定量分析 对于图形2 ① 在λ1处（即用波长λ1 单色光）测a物质的吸光度 ② 用标准浓度a，求Ea2的值 ③ 用标准浓度b，求Eb2的值 ④ 在波长λ2，求Aa+b Aa+b = Aa + Ab = EaLca + EbLcb cb = （Aa+b – Ea2Lca）/Eb2L 对于图形3 即λ1处，为a物质最大吸收，b也有吸收 λ2处，为b物质最大吸收，a也有吸收 解线性方程组法： 例3：有一个两色酸碱指示剂，其酸式（HA）吸收420 nm的光，摩尔吸光系数为325 L/mol?cm。其碱式（A－）吸收600 nm的光，摩尔吸光系数为120 L/mol?cm。HA在600 nm处无吸收，A－在420 nm处无吸收。现有该指示剂的水溶液，用1 cm比色皿，在420 nm处测得吸光度为0.108，在600 nm处吸光度为0.280。若指示剂的pKa为3.90，计算该水溶液的pH值。 例4：某弱酸HA总浓度为2.0?10-4 mol/L。于?520 nm处，用1 cm比色皿测定，在不同pH值的缓冲溶液中，测得吸光度值如下： pH 0.88 1.17 2.99 3.41 3.95 4.89 5.50 A 0.890 0.890 0.692 0.552 0.385 0.260 0.260 求：（1）在520 nm处，HA和A—的?HA, ?A-； （2）HA的电离常数Ka。 例5：络合物NiB22＋在395nm下有最大吸收（此条件时，Ni及B无吸收），当络合剂浓度比Ni2+过量5倍时，Ni2+完全形成络合物。根据下列数据，求Ni2+ +2B＝NiB22＋的稳定常数K。 溶液组成及浓度 (mol/L) 吸光度 (λ=395nm) Ni2+ (2.50×10-4 ) , B(2.20×10-1 ) 0.765 Ni2+ (2.50×10-4 ) , B(1.00×10-3 ) 0.360 * * 第二节　朗伯－比尔定律 一、朗伯－比尔（Lambert-Beer）定律 Beer定律：吸光度与吸光物质浓度c成正比 Lambert定律：吸光度与吸收池厚度l成正比 Lambert-Beer定律：A=Elc （1）吸光度A （2）吸光系数E （3）厚度 l 单位：cm （4）浓度 c 单位：mol/l 或 (% g/ml) 1、几个基本概念 （1）吸光度A [含义]当一束平行单色光通过均匀、非散射溶液时，用A表示溶液对光