第七章植物细胞和次生物质生产详解.pptVIP

第七章 植物细胞培养及次生物质生产 植物的单细胞培养 植物细胞的悬浮培养 植物细胞的大规模培养和次生物质生产 一、植物单细胞培养 定义 植物细胞培养（plant cell culture）：是指在离体条件下对植物单细胞或小的细胞团进行培养使其增值培养形成单细胞无性系或再生植株的技术。 目的及意义 进行细胞代谢研究 用于突变体的筛选、遗传转化 次生代谢物质的生产 （一）单细胞的分离 有完整的植物器官分离单细胞 有培养的组织分离单细胞 1、由植物完整的器官分离单细胞 叶片是最好的材料 （二）单细胞的培养 培养方法主要有： 平板培养法（plating culture） 看护培养法（nurse culture） 微室培养法（micro-chamber culture） 条件培养法（conditioned culture ） 平板培养技术 二、植物细胞的悬浮培养 （一）定义： 细胞悬浮培养（cell suspension culture）：指将游离的细胞或细胞团按照一定的细胞浓度悬浮在细胞培养基中进行培养的方法。 （二）特点 1、细胞可以不断增值，形成高密度的细胞群 体，适于大规模培养 2、能够提供大量的较为均匀的细胞，为研究细胞的生长、分化创造方法和条件。 （三）成功的悬浮细胞培养体系必须满足三个条件： 悬浮培养物分散性良好，细胞团较小，一般在30～50个细胞以下 均一性好，细胞形状和细胞团大小大致相同。 细胞生长迅速，悬浮细胞的生长量一般2～3天甚至更短时间便可增加一倍。 1悬浮培养体系的建立 ①材料 愈伤组织 外植体：幼苗、胚轴、子叶。 例如：新疆紫草愈伤组织的诱导 种子 消毒 萌发 根、胚轴、子叶（作为外植体） 接种到含2.4-D和KT的MS培养基上诱导愈伤组织。 筛选方法 愈伤组织外观为大小均一的小颗粒，疏松易碎、外观湿润、，细胞色泽呈鲜艳的乳白或淡黄色。 挑出愈伤组织培养于高有机质、高激素、低糖的培养基中培养，诱导出更多得到愈伤组织。 悬浮培养 挑选的愈伤组织于液体培养基（ 2克入40ml）120r/min，25 ℃，弱光下培养 2～3d 依次用500um、100um的尼龙膜过滤 均匀的悬浮体系培养物 2、悬浮细胞增值的衡量标准 细胞鲜重（细胞真空去掉多余水分的重量） 细胞干重（细胞收集80℃干燥至恒重的重量） 细胞密实体积（细胞悬浮液离心后的体积，以每ml培养液中细胞总体积所占的ml数表示） 细胞计数（血细胞计数板计算） 3、培养细胞的同步化（周期同步化） 定义： 指的是同一悬浮体系中所有的细胞都同时通过细胞周期的某一特定时期。 目的： 使同一体系中细胞能保持相对一致的细胞学和生理学性质。 细胞周期同步化方法 分选法 低温处理 饥饿法 抑制剂法 4、悬浮培养的方式 （1）分批培养： 指将一定量的细胞或细胞团分散在一定量的液体培养基中进行培养的技术。即将细胞和培养液一次性装入反应器内进行培养的技术。 （2）连续培养 三、植物细胞大规模培养和次生物质生产 （一）、植物产生的代谢物质 1、类型 初生代谢物：淀粉、糖类、蛋白质等 次生代谢物：酚类化合物、黄酮类、生物碱、帖类、皂苷等。 2、植物次生代谢产物在医药、食品、轻化 工业等领域具有重要意义 例如： 麻醉药物：莨菪碱 健身药品：人参皂苷、人参三醇 心血管系统方面：芸香苷、槲皮素 天然色素：叶黄素、类胡萝卜素 香水香料类：挥发油 3、植物细胞大规模培养是生产植物次生产物的理想途径 保护生态环境 提高生产效率 发展新型生物技术产业 植物次生代谢产物市场潜能 （二）大规模培养技术建立三步骤： 高产细胞株的建立和筛选 高产细胞株的增值培养 大规模培养体系建立 （三）适合工业生产细胞株的筛选指标： 1）分散性好，适合大规模悬浮培养 2）均一性好，细胞大小，生理状态一致 3）生长速度快，培养周期短 4）目标产物含量高，容易分离 5）细胞遗传稳定性好 （四）、植物细胞大规模培养系统 用培养瓶在摇床上培养 培养方式 用生物反应器大规模培养 搅拌式生物反应器 常用的生物反应器 气升式生物反应器 旋转式生物反应器 通气搅拌罐式生物反应器 气升式生物反应器 发酵罐 加入培养基 排出培养基及其培养物 连续培养图示： 排出的旧培养基由加入的新培养基进