选修三基因工程的基本操作过程(第一课时).docVIP

选修三 §1.2 基因工程的基本操作过程（第一课时） 【学习目标】 简述基因工程基本操作程序，以及各步骤的一般方法、原理。 【重、难点】 重点：基因工程基本操作程序的四个步骤（1）从基因文库中获取目的基因。（2）利用PCR技术扩增目的基因 ① 　　　　；② 　　　 ； ③ 　 ；④ 　　　　 。 二、目的基因的获取 基因工程概念中的“更符合人们需要”的那个基因就是目的基因了，只有有了目的基因，我们才能赋予一种生物以另一种生物的遗传特性，所以基因工程的基本操作的第一个环节就是目的基因的获取。 【思考】到底什么是目的基因呢？ 1、从基因文库中获得目的基因 基因文库：用多种限制性核酸内切酶或者机械的方法，将某种生物的细胞DNA切成不同片段，并把所有片段随即地分别连接到用同种限制性核酸内切酶切过的基因载体上，然后分别转移到适当受体细胞（如细菌）中，通过细胞增殖而构成的各个片段的无性繁殖体系。 【思考】为什么要构建基因文库？直接从含目的基因的生物体内提取不行吗？ 提示：构建基因文库是获取目的基因的方法之一，并不是唯一的方式。如果所需的目的基因序列已知，就可以通过PCR方式从含有该目的基因的生物的DNA中，直接获得，也可以通过反转录，用PCR方式从mRNA中获得，不一定要构建基因文库。但如果所需目的基因的序列完全不知，或只知道目的基因序列的一段，或想从一种生物体内获得许多目的基因，或者想知道这种生物与另一种生物之间有多少基因不同，或者想知道一种生物在个体发育的不同阶段表达的基因有什么不同，或者想得到一种生物的全基因组序列，往往就需要构建基因文库。 图示过程： 【思考】如何构建基因组文库和cDNA文库？ 基因组文库 cDNA文库 【知识拓展】如何从基因文库中得到我们所需要目的基因？ 从基因文库中找到目的基因是一件比较复杂的事情，要根据目的基因已有的某些信息来进行，下面介绍一种根据基因的部分核苷酸序列找到目的基因的方法： 第一步，通过PCR方法将目的基因已知部分核苷酸序列扩增出来，进行放射性同位素标记（也可以用别的物质标记，如生物素、荧光素等），即用标记了放射性同位素的目的DNA片段作为探针，与扩增出来的DNA杂交。 第二步，将基因文库中的所有菌落转移至硝酸纤维膜上（也可以用其他类型的膜），然后，通过处理溶解消化掉细菌中的蛋白质，并使DNA固定在膜上。 第三步，按Southern杂交的方法进行杂交 第四步，在X光底片上出现黑斑的菌落含有所需要的目的基因（若选用别的标记方法，有阳性信号的菌落则含有所需要的基因） 第五步，从该菌落中再提取目的基因 获取目的基因的依据有 ① ② ③ ④ ⑤ 等 2、利用PCR技术扩增目的基因 PCR是聚合酶链式反应的缩写，它是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。通过这一技术，可以获取大量的目的基因。利用PCR技术获取目的基因的前提是：要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物。 扩增过程：（观察多媒体动画，绘制具体的扩增示意图） 【讨论】通过上述PCR技术扩增过程的学习，总结一下PCR技术中所用的原理以及需要具备哪些条件。 【比较】PCR技术与生物体内DNA复制 DNA复制 PCR技术 区 别 解旋方式 场所 酶 温度条件 合成的对象 联系 3、人工合成目的基因 利用氨基酸的序列合成DNA的方法目前仅限于合成核苷酸相对较少的一些简单基因，而且必须事先知道他们的核苷酸序列。对于许多复杂、目前上不知道核苷酸序列的基因就不能用这种方法合成。 人工合成目的基因的方法主要有两种： 一种是反转录法 该方法专一性强，目的基因不含内含子。但操作过程麻烦，mRNA生存时间短，技术要求高 另一种是化学合成法 该方法专一性强，目的基因不含内含子，可合成自然界不存在的新基因。目前，对于许多复杂的、尚不知道核苷酸序列的基因不能用此法合成 （注：真核细胞的基因编码区含有不能表达的内含子，因此，不能直接用于基因的扩增和表达。获得真核细胞中的目的基因时，一般用人工合成的方法） 【比较】提取目的基因的方法 【巩固训练】 1、下列属于获取目的基因的方法的是 （ ） ①利用mRNA反转录形成 ②从基因组文库中提