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考点二　克隆技术 再悟高考 1．判断正误 (1)组织培养、细胞杂交、显微注射、核移植均为培育草莓脱毒苗所采用的技术(2012·广东，2改编)(×) 提示　只有组织培养为培育脱毒苗采用的技术。 (2)动物杂交瘤细胞产生单克隆抗体体现了细胞的全能性(2012·江苏，22C)(×) 提示　判断是否体现细胞全能性的依据是能否发育成新个体。 (3)去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理(2008·全国Ⅰ，5B)(√) 提示　前者用纤维素酶和果胶酶处理；后者用胰蛋白酶处理。 2．(2013·重庆卷，2)如图是单克隆抗体制备流程的简明示意图。下列有关叙述正确的是(　　)。 A．①是从已免疫的小鼠脾脏中获得的效应T淋巴细胞 B．②中使用胰蛋白酶有利于杂交瘤细胞的形成 C．③同时具有脾脏细胞和鼠骨髓瘤细胞的特性 D．④是经筛选培养获得的能分泌特异性抗体的细胞群 解析　①是获得的已经免疫的B淋巴细胞，A项错误；胰蛋白酶使得组织块分散为单个细胞，B项错误；③同时具有B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的特性，C项错误；④是经筛选后获得的能够分泌特异性抗体的杂交瘤细胞，D项正确。 答案　D 3．(2014·福建卷，33)Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图： (1)步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的________。 (2)步骤②中，重组胚胎培养到________期时，可从其内细胞团分离出ES细胞。 (3)步骤③中，需要构建含有Rag2基因的表达载体。可以根据Rag2基因的________设计引物，利用PCR技术扩增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有________________酶的酶切位点。 (4)为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的________，用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。 解析　(1)核移植过程中，体细胞核移植前要除去受体卵母细胞的细胞核，若不去掉卵母细胞的细胞核，细胞里面就有两个细胞核，造成遗传物质不能稳定表达。 (2)囊胚期细胞开始出现分化，分化为滋养层细胞和内细胞团细胞，其中后者具有发育的全能性，属于ES细胞。 (3)步骤③过程是将目的基因导入受体细胞(ES细胞)中，导入之前应构建基因表达载体。在生物体外可通过PCR技术扩增目的基因，其条件是模板DNA、根据Rag2基因的核苷酸序列设计的引物、四种脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶等，另据题干可知，获得Rag2目的基因需要用Hind和Pst两种限制酶，所选择的载体上应具有Hind和Pst酶的酶切位点，以便目的基因和载体能够连接在一起。 (4)检测目的基因是否翻译出相应蛋白质时，应采用抗原—抗体杂交技术，即提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原－抗体杂交，看是否有杂交带。 答案　(1)细胞核 (2)囊胚 (3)核苷酸序列　Hind和Pst (4)蛋白质 创新预测 4．(2014·南通二模)下图是通过植物细胞工程技术获得紫杉醇的途径，相关叙述正确的是(　　)。 A．该途径依据的原理是植物细胞具有全能性 B．①过程中需控制好培养基中植物激素的比例 C．②过程需用一定浓度的胰蛋白酶处理愈伤组织 D．③过程需使用固体培养基，有利于细胞增殖 解析　本工程不以生产完整植株为目的，只得到愈伤组织细胞，不满足全能性特点，A错误；①过程为脱分化过程，需控制好培养基中植物激素的比例，B正确；动物细胞工程才需用一定浓度的胰蛋白酶处理组织，C错误；本实验需要利用细胞来生产产品，应使用液体培养基，方便添加营养物质和取出代谢产物，D错误。 答案　B 5．(2014·山东《考试大纲》调研卷)模型是对研究对象进行的概括性描述，下图为表示细胞融合的过程模型，请据图回答： (1)若该图表示植物细胞融合的过程，丁细胞称为__________。欲将丁细胞培育成植株，可选用________技术，这一过程的核心就是______和______两个阶段。 (2)若该图表示动物细胞融合的过程，丁细胞称为__________。过程①区别于植物细胞常用的诱导因素是__________。动物细胞培养时，合成培养基中除必要的营养外，通常需要加入__________等一些天然成分。 (3)若该图表示制备单克隆抗体的部分过程，经过选择性培养的丁细胞称为____________。丁细胞的特点是______________________________________。 解析　(1)植物细胞融合获得的细胞称为杂种细胞。需要利用植物组织培养技术将杂种细胞培育成植株，这一培养过程的核心步骤就是脱分化和再分化。 (2)动物细胞融合