08实验八 质粒DNA的提取及琼脂糖凝胶电泳检测.pptVIP

T-载体 * * * * * 实验八 质粒DNA的提取及琼脂糖凝胶电泳检测 实验学时：6 学时 实验类型：综合性 每组人数： 4 人／组 一、实验目的 通过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒的技术和方法。 1.碱裂解法小量制备质粒DNA 实验背景 质粒是染色体外的DNA分子，大小在1kb到200kb。 大多数来自细菌的质粒是双链、共价闭合环状的分子，以超螺旋形式存在，它是细菌内的共生型遗传因子。 质粒按复制方式分为两种类型： 松弛型质粒 20～200个拷贝 /细胞 严紧型质粒 1～2个拷贝 /细胞 质粒性质 二、实验原理 碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。在pH值介于12.0 ~12.5这个狭窄的范围内，线性的DNA双螺旋结构解开而被变性，尽管在这样的条件下，共价闭环质粒DNA的氢键会被断裂，但两条互补链彼此相互盘绕，仍会紧密地结合在一起。 当加入pH4.8的乙酸钾高盐缓冲液恢复pH至中性时，共价闭合环状的质粒DNA的两条互补链仍保持在一起，因此复性迅速而准确，而线性的染色体DNA的两条互补链彼此已完全分开，复性就不会那么迅速而准确，它们缠绕形成网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA，蛋白质-S