生化实验技术离子交换.pptVIP

抗体的检测 – SDS从各收集管中取出20 ?l 用SDS方法检测。 泳道2：标准分子量蛋白 泳道3：不结合的蛋白 （峰1），不含抗体蛋白 泳道4-10：结合的蛋白（峰2），含抗体蛋白 泳道11-15和泳道1：结合的蛋白（峰3），不含抗体蛋白 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 IgG重链50k IgG轻链25k 1 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 0 10 20 30 40 50 60 洗脱液体积（ml） 280 nm 吸光值（相对值） -0.1 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 NaCl浓度（mol/L） 2 3 实验报告要求 1、层析和电泳写一份实验报告。先写层析，然后写电泳。 层析部分包括原理及层析过程、简要操作、层析结果（包括洗脱曲线并注明洗脱体积、实验条件写在洗脱曲线的边缘）、分析实验结果。 2、思考题（选作） （1）应用那些方法能够降低样品溶液中盐的浓度，各种方法的优缺点及适用范围。 （2）离子交换层析与蛋白质的等电点有无关系，试分析说明。 本实验注意事项 所有层析过程和样品处理要用蒸馏水，管路、试管、容器先用自来水洗干净后，再用蒸馏水冲一下。 实验结束以后，清洗所有用过的器皿、回收凝胶、清洗管路、台面擦干净。 值日生清扫。 生物化学实验技术 生化实验技术课安排 1、层析技术（台桂花） 离子交换层析分离纯化抗体（2天） 2、电泳技术（台桂花） SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（可用于抗体分离纯化过程的检测）（1天） 3、免疫检测技术（王桂云） 酶联免疫和双向免疫扩散（2天） 4、多糖分离和鉴定技术（周义发、魏民） 中草药多糖的分离提取和理化性质研究（2-4周，） 生化实验技术课安排 时间： 根据实验内容和学生时间安排 实验报告： 根据实验内容确定 生化实验技术课成绩评定 ① 平时成绩：占50分，包括出勤情况，课堂表现（态度、动手能力和实验结果），实验报告等。 ② 期末考试：占50分，以口试方式，在实验室进行，学生按抽签，分别到指定教师处考试。考试内容为本课程所涉及的实验原理、实验设计、动手操作、结果分析、注意事项等。 层析（chromatography）简介 纸层析 薄层层析 柱层析 气相色谱 液相色谱 （常规液相 / 高效液相） 凝胶过滤 （分子筛层析） 离子交换层析 亲和层析 疏水作用层析 等等 种类 离子交换柱层析 离子交换层析 (Ion Exchange Chromatography) ： 一种吸附层析技术，根据分子极性的差异而进 行分离。 用途：分析和制备各种极性物质（例如蛋白质、 核酸、多糖、及其单体和寡聚物） 离子交换 阳离子交换 阴离子交换 强阳离子交换 弱阳离子交换 强阴离子交换 弱阴离子交换 1、种类 组成 ： 固体支持物 (insoluble matrix) 带电基团 (charged groups) 平衡离子 (counter-ions) 2、离子交换剂 (Ion Exchanger) （1）固体支持物（insoluble matrix) 固体支持物： 无机化合物，例如羟基磷灰石 合成树脂，例如聚苯乙烯二乙烯苯 合成高聚物，例如MonoBeads、SOURCER 多糖，例如葡聚糖、琼脂糖、纤维素 固体支持物决定了以下层析性质： 柱效（efficiency) 容量 （capacity) 回收率（recovery) 化学稳定性（chemical stability) 机械强度（mechanical strength) 流动性（flow properties) （1）固体支持物（insoluble matrix) 阳离子电荷基团 阴离子电荷基团 例如CM、 SP、 S 例如DEAE、QAE、Q （阴离子交换剂） （阳离子交换剂） 电荷基团以共价方式联到固体支持物上。不能通过转型改变带电基团。 （2）带电基团（charged groups) 常见带电基团的化学结构： （2）带电基团（charged groups) 带电基团决定了离子交换层析的种类： 阳离子交换 （强 / 弱） 阴离子交换 （强 / 弱） 带电基团决定了层析的基本性质： 哪种物质结合（type） 结合强弱 （strength） 结合多少（capacity） （2）带电基团（charged groups) 阴离子 阳离子 例如Cl-、OH- 例如K+、Na+ （阴离子交换剂） （阳离子交换剂） 平衡离子与带电基团的电