ABI实时荧光定量PCR仪OLYMPUS共聚焦显微镜简介.pptx

ABI实时荧光定量PCR仪OLYMPUS共聚焦显微镜简介;内容提要;实时荧光定量PCR仪;定量PCR化学原理;SYBR Green Ⅰ染料;Taqman探针;临床检测：疾病的临床早期诊断，如各种肝炎、性病、遗传性疾病、与优生优育相关的疾病以及肺结核等等。 疗效考评：指导制订感染性疾病合理治疗方案，了解感染性疾病病人用药后病情的变化情况，医院、血站及防疫站的确诊，病毒性疾病中病毒的耐药性变异株的测定，为疾病治疗进行指导。 HLA分型：取代传统电泳方法。 遗传病诊断 ：等位基因检测，多基因遗传病的突变检测，基因表达异常所致遗传病检测。 肿瘤诊断 ：肿瘤相关基因表达的检测：包括癌基因抗癌基因、肿瘤转移基因及转移抑制基因，肿瘤标志物如癌胚抗原、同功酶、抗体、 激素、细胞因子、受体等肿瘤耐药基因（MDR）。 ;?药物及医疗相关 ：新药开发研究，超早期感染用药物及疗法的研究与开发，药物疗效研究，新临床诊断及检验试剂的开发，个人基因型与药物疗效之间的关系。 疾病相关 ：新的愈后指标的研究，合理用药的研究，建立病原体病分子诊断标准，疾病的发病监控研究，母婴传播的相关研究，研究ELISA方法的漏检率。 分子生物学方面：研究各种处理对细胞mRNA含量变化的影响，比较染病组织与正常组织中各种mRNA含量差异，DNA或RNA的转染量与实验结果关系的研究，基因整合拷贝数的研究。 动物学方面：动物疫情监测，新的防止疫情发生及控制的药物及方法的研究，转基因动物中目的基因拷贝数与品质的关系研究及早期筛选。 植物学方面：转基因植物中基因拷贝数与性状的关系，监测转基因植物中基因拷贝数的变化，转基因植株早期的筛选，监测农作物病虫害抗药性变化，研究新的药物及方法;其他方面的部分应用 ?进出口检验相关 ： 动物检疫，如各种动物流行病 植物检疫，如各种植物流行病 有害动物，特别是昆虫 食品检测，如各种有害病原微生物，如病毒、细菌、支原体 转基因植物检验，如转基因大豆、西红柿等;应用实例之一：病原体检测与定量;应用实例之二：基因表达差异分析;4 fold down;两条探针分别针对不同等位基因;应用实例之三：SNP分析;实例应用之四：GMO检测;进口定量PCR仪器厂商;ABI荧光定量PCR仪主要型号：;ABI 7500;光源系统：LED激发+PMT扫描机制 检测孔数：48孔 检测通道：3通道 理论支持本公司PCR体系：30ul ;ABI ViiA7 ;激光共聚焦显微镜;原理小结:Confocal 利用放置在光源后的照明针孔和放置在检测器前的探测针孔实现点照明和点探测，来自光源的光通过照明针孔发射出的光聚焦在样品焦平面的某个点上，该点所发射的荧光成像在探测针孔上，该点以外的任何发射光均被探测针孔阻挡。照明针孔与探测针孔对被照射点或被探测点来说是共轭的，因此被探测点即共焦点，被探测点所在的平面即共焦平面。计算机以像点的方式将被探测点显示在计算机屏幕上，为了产生一幅完整的图像，由光路中的扫描系统在样品焦平面上扫描，从而产生一幅完整的共焦图像。只要载物台沿着Z轴上下移动，将样品新的一个层面移动到共焦平面上，样品的新层面又成像在显示器上，随着Z轴的不断移动，就可得到样品不同层面连续的光切图像 。;硬件：激光源 共聚焦显微镜 步近器 检测器 光电倍增管 计算机 图象输出设备（显示器 彩色打印机）。软件：显微镜自动控制和扫描系统、图像处理和分析系统;1、由于pinhole的存在，使得部分杂散光（红黄线部分）没有被PMT探测器探测到，从而提高了成像效果。 2、通过对样品在x-y方向上的逐点扫描，可以形成二维图像。如果调解焦平面在z方向的位置，连续扫描多个不同z位置的二维图像，则可以形成一个3D图像。;;;;共聚焦显微镜应用领域;应用实例;二、三维图像重建 由共聚焦显微镜的组织光学切片功能采集获得的二维图像数据，经计算机图像处理三维重建软件重组，可得到标本的三维立体结构，揭示亚细胞结构的空间关系，从而能十分灵活直观地进行形态学研究。;四、荧光的定性、定量分析 激光扫描共聚焦显微镜可对单标记或多标记细胞及组织标本进行定量分析，并显示荧光沿Z轴的强度变化；另外，借助于光学切片功能可在毫不损失分辨力的条件下测量标本深度的荧光分布。可以准确监测抗原表达、荧光原位杂交及细胞结合和杀伤的形态学特性并进行定量分析。; 利用Fluo-3、Indo-1、Fura-Rad等多种荧光探针，激光扫描共聚焦显微镜可对单个细胞内离子（Ca2+、K+、Na+、Mg2+、pH等）的动态变化做实时定量分析；可以定量探测胞内Ca2+对肿瘤启动因子、化学因子、生长因子及各种激素等刺激的反应；使用双荧光探针Fluo-3和SNAF可同时测定Ca2+和pH值。也就是说利用