DNA重组技术的基本工具(47页)介绍.ppt

2、常用的载体： 质粒（最常用） λ噬菌体的衍生物， 动植物病毒等 能复制并带着插入的目的基因一起复制 有切割位点 有标记基因 3、质粒 本质：小型环状DNA分子。 分布：许多细菌、 酵母菌等生物 工具3：运载体 1、需要的条件 　⑴有1~多个限制酶切点 　⑵能在受体细胞中自我复制，或整合到受体细胞的 染色体DNA上复制 　⑶有某些标记基因，便于筛选 ⑷对受体细胞无害 2、常用运载体 　 质粒、λ噬菌体的衍生物或某些动植物病毒 3、质粒　 2和7能连接形成…ACGT… ????????????? …TGCA…； 4和8能连接形成…GAATTC… ???????????? …CTTAAG…； 3和6能连接形成…GCGC… ???????????? …CGCG…； 1和5能连接形成…CTGCAG… ???????????? …GACGTC…。 教材P7思考与探究 1 1、在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（ ） 同种限制酶 B. 两种限制酶 同种连接酶 D. 两种连接酶 反馈练习： 2、不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制 （ ） B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA D 3、下列不适合用于基因工程的运载体 是（ ） A、质粒 B、噬菌体 C、细菌 D、病毒 选我 C 4、下列说法正确的是：（ ） A、限制酶的切口一定是GAATTC碱基序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体 C、重组技术所用的工具酶是限制酶、 连接酶、运载体 D、利用运载体在宿主细胞内对目的基因 进行大量复制的过程可称为“克隆” 选我 D 审题 5、以下是两种限制酶切割后形成的DNA片段，试分析： ①GC… ②AATTC… ③ …GC ④ …CTTAA CG… G… …CG …G (1)其中①和 是由一种限制酶切割形成的 末端，两者要重组成一个DNA 分子，所用DNA连接酶通常是 。 （2） 和 是由另一种限制酶切割形成的 末端，两者要形成重组DNA片段，所用的连接酶通常是 。 反馈练习： 1.1944年艾弗里(O.Avery)等进行了肺炎双球菌体外转化实验,证明了DNA是生物的遗传物质,并且证明了DNA可以从一种生物个体转移到另一种生物个体,成为基因工程的先导 基础理论和技术发展催生了基因工程 科技探索之路 20世纪中叶，基础理论取得了重大突破 2.1953年沃森和克里克建立了双螺旋结构模型,使生物学进入分子水平。 1958年梅塞尔松和斯塔尔,以大肠杆菌为实验材料,运用同位素示踪技术,用实验证明了DNA的复制是以半保留方式进行的. 1957年克里克提出中心法则的确立 3.1963年尼伦伯格和马太做蛋白质体外合成实验,破译编码氨基酸的遗传密码. 1)基因转移载体的发现 2)工具酶的发现 3)DNA合成和测序技术的发明 技术发明命使基因工程的实施成为可能 1967年罗思和赫林斯基发现细菌质粒有自我复制能力,为基因转移找到一种运载工具. 1970年阿尔伯(W.Arber)、内森斯(D,Nathans)、史密斯(H.C.Smith)细菌中发现了第一个限制酶 1977年科学家又发明了DNA序列分析方法 1965年桑格发明了氨基酸序列分析技术 4) DNA体外重组的实现 1972年伯格(P.Berg)首先在体外进行了DNA改造的研究,成功地构建了第一个人工体外重组DNA分子. 1973年博耶和科恩使重组DNA转入大肠杆菌中,转录出相应的mRNA,并使外源基因可以在原核细胞中成功表达,至此表明基因工程正式问世. 1973年科学家才将质粒作为基因的载体使用 这是基因工程发展史上第一个成功的基因克隆实验 1973年科恩第一个建成“基因工程菌”，并创立基因工程模式 1973年称这“基因工程元年”， 科恩被称为基因工程发展史上的创始人 科恩并向美国申报了世界上第一个基因工程