第4讲 DNA的复制机理与PCR技术2-2014.pptVIP

(一)、PCR技术的基本原理 PCR是指那些模拟体内DNA复制的方式在体外选择性的扩增DNA上的某个特定区段的技术。 PCR的4种基本要素： ①ssDNA模板、②ssDNA引物、③合成DNA的4种原料dNTP、④DNA聚合酶。 PCR反应的3种基本过程： ①变性、②退火、③延伸 Schematic diagram of PCR DNA片段指数扩增用下式表示： (2n – 2n) × m 式中：n为循环次数；2n是长度不定的初级和次级延伸产物；m是原始模板拷贝数。 (二)、PCR反应所需物质与扩增过程 Taq DNA聚合酶：2499bp，94kD，832氨基酸 嗜热水生菌Thermus aquatics YT-1菌株。 活性： 温度 半衰期 温度 合成速率： 92.5 ℃ 130分钟 72-80 ℃ 150-300 个/s 95 ℃ 40分钟 70 ℃ 约60个/s 97.5 ℃ 5-6分钟 55 ℃ 约22个/s