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一、DNA的复制 （一）DNA的半保留复制（semicoservative replication） 半保留复制的意义： 复制的这种方式可保证亲代的遗传特征完整无误的传递给子代，体现了遗传的保守性。 即新的双链DNA中: 一股链来自模板 一股链为新合成的 前导链 冈崎片段 滞后链 DNA的半保留不连续复制 semi-discontinuous replication DNA复制叉向前移动过程中需要 - 解链酶，拓扑异构酶 ，单链结合蛋白 8. DNA聚合酶（DNA polymerase） DNA聚合酶催化的反应 在大肠杆菌中至少发现了五种DNA polymerase，分别是DNA polymerase I、II、III、IV和V，其中Polymerase I发现最早（1956年），而polymerase IV和V直到1999年才发现。 DNA聚合酶的作用机理-多聚核苷酸是通过一个核苷酸的C3’-OH 与另一分子核苷酸的5’-磷酸基形成3’,5’-磷酸二酯键相连而成的链状聚合物。 ndATP ndGTP ndCTP ndTTP 模板（DNA），引物（RNA，DNA） DNA聚合酶 DNA ＋ 4nPPi DNA polymerase III(DNA pol III) 是由多种蛋白质组成的复合物, Mr 高达900Kd。 每个Ecoli约含10分子DNA pol III，虽然pol III的量很少，但活性很强，为pol I的15倍，模板和pol II大致相同，除聚合酶活性外，还具有3′→5′核酸外切酶的活性，但无5′→3′核酸外切酶的活性，DNA pol III是原核细胞DNA复制的主要酶。它催化脱氧核苷酸的合成速率达到体内DNA的合成速率。这个酶的缺陷株往往是致死的。 四、DNA复制的高度忠实性 DNA的复制是高度忠实的，出现差错的机会很小，出错的几率在10-8～10-10之间，即每复制108～1010bp才出现1次错误。主要有5种机制使DNA复制的错误率降到很低。 2. DNA聚合酶的反应机制。 3. DNA聚合酶具有自我校对能力，可及时切除错配的碱基。 4. DNA修复。 5. RNA引物。 1. 通过核苷酸合成的调节机制保持细胞内4种脱氧核苷 三磷酸浓度的平衡。 真核细胞端粒的复制 端粒（telomere）：指真核细胞线状染色体末端的 DNA序列。 端粒酶（telomerase）：由RNA和蛋白质组成的核糖核蛋白复合物，以端粒的RNA（有特殊的序列）为模板，通过反转录合成端粒DNA。 RNA生物合成（转录） 概念：转录、有意义链、RNA聚合酶/全酶/核心酶、启动子/TATA盒/增强子、 σ因子/ ρ因子、内含子/RNA剪接（splicing）、snRNA/hnRNA 转录生成的RNA主要的是rRNA，tRNA，mRNA RNA转录合成的特点 真核生物与原核生物启动子 RNA转录的起始、延长和终止 真核生物与原核生物转录的主要区别 启动子：RNA聚合酶结合DNA的部位，包括一些转 录调控组件 TTGACA盒子 TATA盒子 启动子区 结构基因 -10bp +1 转录 初级转录物RNA -35bp 原核生物启动子 TATA盒子 - pribnow box 真核启动子结构 TATA框合又称Hogness框 蛋白质生物合成（翻译） 概念：遗传密码/密码子/反密码子、开放阅读框架（ORF）、起始密码/终止密码、同义密码子、rRNA/核糖体、粗面内质网、移码突变、SD序列、信号肽 mRNA、rRNA、tRNA在蛋白质合成中的作用 密码子的特点 原核生物和真核生物核糖体的比较 蛋白质合成过程 原核细胞和真核细胞蛋白合成的比较 蛋白质生物合成所需的能量 蛋白质生物合成的抑制剂 密码子的特点 摆动性：一种氨基酸可有多个密码子 反密码子与mRNA的第三个核苷酸配对时，不严格遵从碱基配对原则，可出现U-G,I-C,I-A,此种配对为不稳定配对，又称摇摆性。一般前两个碱基决定其专一性，第三位碱基可有变异 tRNA反密码环 5′ 3′ UGU Thr ACG 5′ 3′ mRNA 1966年F.Crick提出的摆动假说（wobble hypothesis） 4．肽链的终止与释放： 释放因子（release factor RF）能识别终止密码子与终止密码子结合。 UAA RF1 or RF2 终止密码子 RF-1：识别UAA和UAG RF-2：识别UAA和UGA RF-3：RF-3和GTP形成 复合物，是一种GTP结 合蛋白，可促进核糖体 与RF-1和RF-2的结合。