专题二课题2土壤中分解尿素细菌分离和计数和3分解纤维素微生物分离导学和答案.docVIP

专题二课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 【基础知识】 一、 1．筛选菌株 (1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于 生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时或 其他微生物生长。 (2)选择培养基：在微生物学中，将允许 种类的微生物生长，同时 和 其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。 2．当样品的 足够高时，培养基表面生长的一个落，来源于样品稀释液中的一个 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。此外，测定微生物数量的常用方法还有直接计数。 3．设置对照 设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响，提高实验结果的 。例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养的培养基作为空白对照。 二、实验设计 关于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下： ．取样从肥沃、湿润的土壤中取样。先3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的 中。 2．制备：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显 选择培养基上的数目，因此，牛 ，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。 3．微生物的与观察 将0g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250 mL)，充分摇匀，吸取上清液 ，转移至盛有 的生理盐水的无菌大试管中，依次等比稀释至107稀释度，并按照由107～103稀释度的顺序分别吸取 进行平板涂布操作。每个稀释度下需要3个选择培养基、个牛肉膏蛋白胨培养基。 将涂布好的培养皿放在30℃温度下培养，及时观察和记录。 挑选选择培养基中不2-lO的颜色反应。 4．细菌的计数 当菌落数目稳定时，选取菌落数在 的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出 ，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？ 为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？ 、 、 、 、 1．土壤取样：采集土样时，应选择富含 的环境。 2．选择培养： 阅读资料二“选择培养基”，回答以下三个问题： 〖思考1〗纤维素分解菌选择培养基属于 培养基，原因是什么？。 〖思考2〗培养基选择作用机制是什么？ 〖思考3〗若设置一个对照实验说明选择培养的作用，应控制的变量是什么？ (1)目的：增加纤维素分解菌的 ，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物。 (2)制备选择培养基：参照课本旁栏中的比例配制。 (3)选择培养：称取土样20 g，在无菌条件下加入装有30mL培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在 上，在一定温度下振荡培养1～2 d，直至培养液变 。也可重复选择培养 。 （4）梯度稀释： 依次将培养液稀释101～107倍。思考是如何操作的？ (5) 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 1制备培养基：参照课本旁栏中的比例。 2倒平板操作。 3涂布平板：将稀释度为104～106的菌悬液各取0．1 mL涂布在平板培养基上，30℃倒置培养。 (6)刚果红染色法：挑选产生 的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。 〖思考4〗本实验流程与尿素分解菌的分离实验流程有哪些异同？