基因工程技术PPT-分子生物学课件.pptVIP

连接酶：两种 DNA连接酶：连接双链中两条DNA链之间形成磷酸二酯键，封闭双螺旋骨架缺口。需要一条DNA链的3‘-末端具有游离的OH，另一条DNA链5’-末端的磷酸基团-P，吸能反应，需ATP存在。也可做DNA修复。但不能连接两条单链DNA分子和环化的单链DNA分子。而且只能连接粘性末端。 T4 DNA连接酶：是从感染T4噬菌体的E．coli中分离得到的一种连接酶。粘性末端、平末端、平末端上加人工接头。用途比DNA连接酶广泛，是分子生物学研究及基因克隆中较常用的连接酶。 其他酶：末端修饰酶 末端脱氧核苷酸转移酶（terminal deoxynucleotidyl transferase） 　　简称末端转移酶。在合适的反应系统中，这种酶使DNA片段平末端的3′-OH加上同聚核苷酸，产生具有 poly（A）、或poly（T）、或poly（G）、或poly（C）的粘性末端。 碱性磷酸酶 　 根据DNA重组的需要，为防止两DNA片段末端之间连接，经常采用碱性磷酸酶处理，使DNA末端的5′-P成为5′-OH。目前采用的碱性磷酸酶有两种，即来源于大肠杆菌的细菌碱性磷酸酶（BAP）和来源于小牛肠的小牛肠碱性磷酸酶（CIP）。CIP的比活性比BAP高出10倍以上，而且对热敏感，便于加热使其失活。 重组子导入受体细胞： 把重组DNA导入受体细胞进行扩增.根据所用载体的特性选择适宜的受体细胞（原核，