免疫生物学剖析.pptVIP

荧光SiO2纳米颗粒对间充质干细胞表面表达抗原CD44识别 研究背景 间充质干细胞（MSCs）是中胚层的干细胞, 这一类细胞可以通过体外贴壁培养加以分离, 然后分化为多种造血以外的组织细胞, MSCs 还易于外源基因的转染和表达, 因而可能是细胞治疗和基因治疗的理想靶细胞。 CD44 作为细胞表面跨膜糖蛋白, 也存在于间充质干细胞的表面, 主要参与细胞间的相互作用, 在细胞膜外的区域有多个潜在的N-糖苷键连接位点, 可以连接多种糖类分子, 是目前识别间充质干细胞的一个理想点位。 研究意义 利用包裹荧光染料的SiO2颗粒所制备的生化探针可以应用到很多检测领域, 检测目标包括生化环境的酸度、抗原-抗体结合特异性识别目标生物组分以及食物中的细菌。 应用包裹荧光染料的纳米SiO2颗粒进行间充质干细胞表面表达抗原CD44的识别, 从而成功实现了人脐带血中间充质干细胞的成像识别实验, 为应用荧光二氧化硅纳米粒子识别特异细胞奠定了基础。 研究进展 免疫研究中典型的纳米颗粒有纳米金，量子点，纳米TiO2，碳纳米管及介孔纳米材料等。 研究进展 2010年Ambrosi等将纳米金应用于ELISA中，实现了对肺癌生物标志CA15-3的超灵敏检测。该方法中，纳米金作为载体结合多个抗体，对信号检测实现了放大。灵敏度提高了一倍，大大缩短检测时间。 存在问题： 有少的研究认为它在一定尺寸下有生物毒性 ； 纳米金的生物相容性问题没有得到完全认可； 金纳米颗粒溶液为不稳定体系，会逐渐沉积。 研究进展 有研究采用多壁碳纳米管-壳聚糖-硫堇纳米复合物和半胱氨酸盐共同修饰玻碳电极表面固载抗体制得具有高灵敏的甲胎蛋白免疫传感器，采用交联法对抗体进行固定。 存在问题: 固定稳定性较差； 戊二醛对生物材料的活性有一定影响。 量子点（QDs）与Ab偶联后得到的生物共轭体( QD-Ab) ，可作为荧光探针用于生物成像、免疫检测，从而达到病原菌检测，肿瘤的实时监测与治疗等目的。 QDs 的主要缺陷是它的细胞毒性，目前得到的量子点大多数含有重金属组分，如镉和铅等，进入生物体内后会产生细胞毒性，并对肝脏造成损伤。 传统的生物发光标记材料( 如有机染料、金属和半导体纳米晶等) ，具有发射带宽、反斯托克位移较小和空间分辨率较浅等问题，且对生物组织有损伤，有背景荧光，荧光量少，荧光寿命短，光稳定性较差。 荧光二氧化硅纳米颗粒 优点：具较强的光敏感性和高度光稳定性； 具有良好的水溶性； 易于表面修饰及容易合成； 纳米二氧化硅无毒性； 缺点：纳米二氧化硅颗粒在应用时，表面要进行氨基、巯基或羧基等的修饰，这些修饰可能会改变颗粒的分散状态，从而影响其光敏感性、选择性以及重现性，尤其是颗粒聚集会影响到颗粒与检测目标的结合。 用荧光二氧化硅纳米颗粒连接抗体对间充质干细胞表面CD44 进行荧光显色并进行细胞成像，从而间接识别间充质干细胞。 研究内容 1 荧光纳米二氧化硅粒子的制备及表面氨基修饰 2 纳米颗粒与抗体的连接 3 间充质干细胞（MSCs）的分离与培养 4 荧光纳米粒子标记间充质干细胞 5 纳米粒子的表征（倒置激光共聚焦显微镜分析连接抗体后的荧光颗粒分散性） 连接抗体后荧光SiO2纳米颗粒分散性 连接了抗体的颗粒恢复了较好的分散性，虽然不是单分散，但是能够基本均匀分散在缓冲溶液中而没有明显的聚集，这样的分散对生物检测有非常重要的意义，同时荧光强度基本没有受到影响。 区域中的梭形或纺锤形间充质细胞的特殊形状, 说明CD44 抗体标记的荧光二氧化硅纳米颗粒特异性的识别了CD44。 荧光纳米颗粒标记细胞的颜色在免疫识别完成后的24 h 后仍然保持着很好的荧光性, 证明包裹荧光染料的SiO2纳米颗粒起到了保持稳定荧光性的作用。 问题与展望 纳米材料在蛋白质分析领域已表现出独特的优势，并得到广泛的应用。但在应用过程中存在很多问题：纳米材料的尺寸控制、使用成本、材料表面修饰、抗体的选择、操作步骤的简化等，需进一步探究。 这些问题的解决将进一步拓宽纳米材料在蛋白质分析、酶标记、抗体功能化修饰等生物医学及临床等领域的应用范围。 * * 研究进展 研究内容 Figure3 Confocal image of MSCs with CD44 antibody-NH2-FSNPs