第七含锌蛋白和含锌酶剖析.pptxVIP

第七章 含锌蛋白和含锌酶;水解酶（hydrolase），六大酶类之一，催化水解反应的酶；也可以说它们是一类特殊的转移酶，用水作为被转移基团的受体。 A–B + H2O → A–OH + B–H 水解酶（hydrolase）是六大酶中研究得最多应用最广泛的一类。根据水解键的类型分为肽酶(peptidase)、酯酶(esterase)、糖苷酶(glycosidase)等多个亚类。 不少水解酶的活性与金属离子有关； 水解金属酶中很多与Zn2＋有关，其次是Ca2＋、Mg2＋，还有少数酶含Mn2＋，Ni2+。 水解过程不发生电子转移，所以金属离子的氧化态在催化过程中不变化。 ;水解;水解酶的类型;酶;水解酶中的金属离子;某些金属离子探针 ;Zn(II)配合物与类似的二价阳离子配合物的几何构型 ;锌的概述;Zn2+在锌酶或蛋白中主要发挥催化和结构调控功能； 具有结构功能的Zn2+中心和具有催化功能的Zn2+中心之间最大的区别是，与后者配位的H2O分子在前者中通常被一个氨基酸残基取代, 从而增强前者Zn2+中心配位结构的稳定性。 有时具有结构功能的Zn2+可以转化为具有催化功能的Zn2+。;蛋白质为高分子物质，不能透过细胞膜，必须水解成小分子才能被肠吸收。蛋白质由各种肽酶催化，水解成小分子，被肠吸收。 蛋白质中肽键的水解非常缓慢，在生理条件下，其水解半衰期为10~1000a。 天然肽酶几乎无一例外地含有Zn(II)。锌肽酶大约可以分为五组,共30几个成员,其中羧肽酶A(carboxypeptidase A, CPA)和嗜热菌蛋白酶(thermolysin)研究得最清楚，最广泛，因此他们被作为锌蛋白酶的代表。近年来越来越多的锌肽酶的结构被测定，使有关结构与生物功能关系的研究取得了新的进展。 ;羧肽酶A， carboxypeptidase A，CPA; CPA active site of CPA;Zn2+是酶活性所必需的组分。与His69, Glu72和His196配位，第四个配位位置是一个结合力很弱的水分子。这个H2O分子还与Glu270之间存在氢键作用。Zn2+除了直接与氨基酸残基配位外，Arg145,Tyr248,Glu270的侧链基团也参与与底物的结合，这对酶的催化活性至关重要。;;X射线结构分析发现，羧肽酶A与酪氨酸残基的结合过程必须通过活性中心的重排，特别是酶分子的构象的重大改变才能实现。首先，结合底物时Arg145和Glu270移动了0.2nm。Arg145的位移带动了肽链的扭转，使Tyr248移动了1.2nm。这个距离相当于整个酶分子直径的1/4。酪氨酸残基Tyr248的酚基从酶的表面移到底物的肽键附近，方向也有向上变为向下。 酶与底物结合之后可能的机理是：谷氨酸残基Glu270激活了水分子，提高了水分子中氧的亲和力，后者向底物肽键羰基的碳原子进攻，然后谷氨酸残基Glu270的羰基质子化。与此同时，酪氨酸残基Tyr248提供一个质子，肽键断裂，底物分解。 该过程中，Zn2+起了使肽键产生张力的作用，从而促进了底物的水解。酶与底物结合后，由于Zn2+的作用，底物肽键的羰基原子的电子云密度降低而呈正电性，因此，羰基碳原子更容易接受亲核进攻。;嗜热菌蛋白酶(thermolysin);晶体结构分析表明，Zn2+处于五配位状态，与His142, His146, Glu166和一个水分子结合，这与羧肽酶中Zn2+的配位状态十分相似。4个Ca2+有2个相距0.38 nm，另外2个相距较远。其热稳定性非常好，80?C加热1h，仍保持50%活性。Ca2+是嗜热菌蛋白酶具有较高热稳定性的因素之一。;嗜热菌蛋白酶与底物结合时，Zn2+处于五配位状态，底物并不取代与Zn2+配位的分子，待切断肽键的羰基作为第五配体与Zn2+配位而使羰基极化，同时与Zn2+配位的H2O分子接近的Glu143的羧基。Glu143质子化后，与Zn2+配位的OH- 向羰基碳原子发动亲核进攻。随后His231给出1个质子，使肽键上的氮原子带正电荷。最后C-N键断裂生成产物。;第三节 碳酸酐酶, Carbonic anhydrase, CA; 在哺乳动物中，碳酸酐酶有11种同功酶。其中以人碳酸酐酶II，III(HCA II, HCA III)，和牛碳酸酐酶II (BCAII)研究最多。这三种碳酸酐酶的一级结构分别含有260，259，264个氨基酸残基，其中脯氨酸含量最高。不含二硫键，由单一肽链组成，每个分子含有一个Zn2+离子。 碳酸酐酶最重要的生理功能是催化二氧化碳的水合作用。在人和动物体内，由碳酸酐酶催化CO2水合生成HCO3- ，当HCO3-随血液循环到肺泡后，又由碳酸酐酶催化使它