第七花药和花粉培养剖析.pptVIP

（二）花粉培养技术 1、取材时期：四分体时期到单核早期。 2、花粉的分离： 3、小孢子纯化： 对获得的小孢子混合物进行分级过筛、梯度离心处理纯化小孢子 4、花粉的培养 1）自然散落法(漂浮培养自然释放法) ： 将花药接种在预处理液或液体培养基上，待花粉自动散落后，收集培养。 2）机械游离法 a.磁搅拌法：用磁力搅拌器低速搅拌培养液中的花药，使花粉游离出来； b.挤压法：在烧杯或研钵中挤压花药，将花粉挤出后收集培养。 花粉培养方法 1、直接培养：花粉置琼脂固化培养基上培养。 2、预培养：花药在液体培养基中先培养2-4d，然后挤出花粉，经离心洗涤后悬浮于液体培养基中培养。 3、双层培养：先铺一层琼脂固体培养基（加入失活花药的浸提液），凝固后，在其上接种密度为1*104的花粉悬浮液，接种量以1mm层厚为宜。 4、看护培养：利用花药或花药愈伤组织释放出的活性物质促进花粉小孢子发育。 5、微室培养：利用小的盖玻片和凹穴载玻片形成微室进行花粉培养。 看护培养图解 四、花药和花粉培养中的白花苗现象 白化苗的控制 花粉发育时期：花药培养中，白花苗的比例随接种时花粉发育时期的延迟而提高。 培养基成分：高浓度的2,4-D会使花粉愈伤组织分化出更多的白化苗 培养温度：当培养温度提高时，白花苗的数目也随之增加。 * * 小孢子母细胞经减数分裂产生4个一群的单倍体细胞，这个发育时期称为四分体（tetrad）。 * 由四分体刚刚解体成单细胞这一阶段的单倍体细胞称为小孢子。小孢子继续发育，其核进行第一次分裂后形成1个精核（generative nucleus）和1个营养核(vegetative nucleus)的二核细胞；营养核再分裂一次形成2个精核和1个营养核的三核细胞。我们把这种二核或三核细胞称为花粉。在花粉培养过程中，通常是取花粉发育处于单核靠边期和双核早期阶段的花粉细胞进行培养。 * 可以避免花药壁、花丝和药隔等体细胞组织的干扰，具有单细胞、单倍性和较高同步性等特点 * 花药供体植株的生长条件对花药培养反应听影响委大。水稻、小麦、大麦等主茎穗诱导率明显高于分蘖穗花药愈伤组织的诱导率。 * 由四分体刚刚解体成单细胞这一阶段的单倍体细胞称为小孢子。小孢子继续发育，其核进行第一次分裂后形成1个精核（generative nucleus）和1个营养核(vegetative nucleus)的二核细胞；营养核再分裂一次形成2个精核和1个营养核的三核细胞。我们把这种二核或三核细胞称为花粉。在花粉培养过程中，通常是取花粉发育处于单核靠边期和双核早期阶段的花粉细胞进行培养。 * 培养基是花药培养中影响花粉启动和再分化的重要条件，培养基成分是否合适往往是决定花药培养成功的关键因素，而且还影响发育的方式。 激素，在此花药的诱导脱分时，需要有较适宜的细胞分裂素和生长素配比，从而有效地诱导花粉细胞启动分裂，同时又控制二倍体细胞的分裂。高浓度的2，4-D主要诱导花药形成愈伤组织，而不能形成胚状体，从而增加了二倍体细胞发育的机会。 包括蔗糖、麦芽糖、纤维二糖、葡萄糖、果糖、海藻糖等。不同作物所需最适的碳源种类及浓度的所差异。一般认为单子叶植物比双子叶植物需糖的浓度要高。玉米中蔗糖效果最好；而麦类作物中，麦芽糖似乎为最好的碳源。 * 植株形态学鉴定法： 单倍体植株瘦弱，叶片窄小，花小柱头长，花粉粒小，不结实。 色体直接计数法： 通常取根尖、茎尖等分生组织区进行制片，直接计数染色体数目。 加倍方法： 1、秋水仙素诱导 （1）浸泡法 无菌条件下以一定浓度的秋水仙素浸泡再生小植株，再转移至新鲜培养基中培养。 （2）生长锥处理 秋水仙素水溶液直接涂抹生长点（顶芽或腋芽）。 （3）培养基处理 将单倍体植株和任何一部分作为外植体，种植在附加一定浓度和秋水仙素的培养基中培养一段时间后，转入无秋水仙素的相同培养基中继续培养诱导胚状体。 第七章 花药和花粉培养 一、 概述 （一）概念 花药培养:把发育到一定阶段的花药接种在人工培养基上,使其中的花粉发育成单倍体植株的过程. 花粉培养(小孢子培养):从花药中分离出花粉粒,使之成为分散的或游离状态,通过培养使花粉粒脱分化,进而发育成完整植株的过程. 花药培养和花粉培养是获 得植物单倍体的有效方法之一 二倍体(diploid )植物其单倍体（haploid）即一倍体（monoploid ）如， 玉米 2n = 2x = 20 n= x = 10； 水稻 2n = 2x = 24 n= x = 12 四倍体(tetraploid)植物其haploid为dihaploid 如，马铃薯 2n = 4x = 48， n = 2x = 24 六倍体(hexap