基因克隆的载体与受体解说.ppt

生物技术核心课程 第一讲 基因工程概论 第二讲 基因工程的主要技术 第三讲 基因工程的酶学基础 第四讲 基因克隆的载体与受体 第五讲 目的基因的克隆 第六讲 克隆基因的分离 第七讲 新基因的功能鉴定 第八讲 克隆基因的表达与调控 但如果在其寄主细胞中存在着一种接合型的质粒，非接合型质粒也可以被转移的。这种由共存的接合型质粒引发的非接合型质粒的转移过程，叫做质粒的迁移作用。 A non-conjugative plasmid may, under some circumstances, be cotransferred along with a conjugative plasmid when both are present in the same cell. 在没有选择压力的情况下，两种亲缘关系密切的不同质粒，不能在同一宿主细胞中稳定地共存，这一现象称为质粒的不亲和性(plasmid incompatibility)，也称质粒的不相容性。 亲缘关系较近的不同质粒进入同一细胞后，必定有一种质粒在细胞的增殖过程中被逐渐排斥(稀释)掉，称这些质粒间是不相容的。 彼此不相容的质粒属于同一个不亲和群(incompatibility group)。而彼此能够共存的亲和质粒，则属于不同的不亲和群。这是因为它们的复制机制相同。 现已鉴别出大肠杆菌质粒有25个以上的不亲和群，它们之间是相容的，而同一个不亲和群内的质粒是不相容的。 To be able to coexist in the same cell, different plasmids must be compatible. If two plasmids are incompatible then one or the other will be quite rapidly lost from the cell. Different types of plasmid can therefore be assigned to different incompatibility groups on the basis of whether or not they can coexist, and plasmids from a single incompatibility group are often related to each other in various ways. replicate independently single sites for a large number of restriction endonucleases selectable marker low molecular weight, multiple copies ; 缺少mob基因 插入外源基因的重组质粒较易导入宿主细胞并复制和表达。 Eukaryotic vector 1. Very high capacity vectors (Ch. 24) YAC BAC 2. Ti plasmid for transgenic plant (Discussed in the end of this chapter) Agrobacterium tumefaciens (農桿菌) 3. 高等植物的克隆载体 土壤农癌杆菌的Ti, Ri 质粒 Ti质粒的结构和特性: 在Ti质粒诱导的肿瘤细胞中，具有大量的不正常的氨基酸类物质-冠瘿碱(opine)，这是一类相对分子质量较小的碱性氨基酸衍生物，由Ti质粒DNA编码。正常植物细胞不能合成和利用冠瘿碱，而土壤农癌杆菌能够选择性地利用这类化合物作为自己唯一的能源、碳源和氮源。最常见的冠瘿碱有章鱼碱(octopine)、胭脂碱(nopaline)和农杆碱(agropine)。 Ti质粒的结构和特性(序): 根据所产生的冠瘿碱的类型和差别，可将冠瘿瘤细胞分为章鱼碱型、胭脂碱型和农杆碱型肿瘤细胞。 Ti质粒是环状dsDNA，相对分子质量为1.2×108，大约由1.5×105～2×105碱基对组成(约185kb)，相当于细菌染色体的3%-5%。图8-19为章鱼碱型质粒和胭脂碱型质粒的结构。 Ti 质粒的 T-DNA部分转移至植物细胞 Ti-DNA改造成载体 两个载体战略 T-DNA, Ti plasmid 共整合战略 载体功能分类： ①克隆载体 ②穿梭载体 ③表达载体 （1）克隆载体：以繁殖外源DNA片段为目的载体通称为克隆载体。 克隆载体按来源分： ①质粒载体 ②噬菌体载体 ③酵母人工染色体载体 ④病毒载体。 （2）穿梭载体