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薄层色谱系统 薄层板 硅胶—为使用最广泛的薄层材料 氧化铝—有碱性、中性、酸性 硅藻土—为化学中性吸附剂 纤维素—天然多糖类 聚酰胺—为特殊类型有机薄层材料，对能形成氢键的物质有特别的选择性。 薄层色谱参数 保留参数（Rf值） 用来表征斑点位置的基本参数是保留因子，通常称作比移值，用Rf表示。 Rf=Ls/L。， 流动相与展开体系 液-固吸附 ——在该色谱中，溶质的保留和分离选择性决定于三个因素： 薄层扫描 原理 薄层定量方法可分为 直接法——测定照射光照射色谱后，因被测物斑点的存在引起的透射光和反射光的变化。并通过随行标准比较待测斑点的量。 间接法——将部分照射光的能量转换成较长波长的荧光，即荧光测量。 薄层色谱定量测定的光学方法是基于测量斑点和薄层空白处光学响应信号的差值。 定性、定量方法 定性方法 利用保留值 测定Rf值 测定相对Rf值，即Rx值。 利用二维色谱（改变色谱条件，比较Rf值是否一致） 应用 药物鉴别——采用标准对照法 杂质检查 杂质对照品法 高低浓度法 药物标准品对照法 不允许有杂质斑点存在，即以方法灵敏度来控制杂质量。 含量测定——主要用于中药有效成分的分析 * * 第四章 薄 层 色 谱 法 概 述 1938年俄国人首先实现了在氧化铝薄层上分离一种天然药物。1965年德国化学家出版了“薄层色谱法”一书，推动了这一技术的发展。 因TLC法设备简单，分析速度快，分离效率高，结果直观，很快被用作定性和半定量的方法。 70年代中后期发展了高效薄层色谱。80年代以后发展了薄层色谱光密度扫描仪，和各步操作的仪器化，并实现了计算机化。 薄层色谱的特点 仪器简单，各单元独立性强 可多个样品同时分析 快速给出分析结果，适宜于反应过程中间控制 耐受污染能力强，不同于HPLC对异物污染不具有耐受性，会导致柱效快速降低 成本低廉 薄层板活化 涂布后的薄层先在室温下阴干，在使用前置适当温度烘烤一定时间进行活化，然后置干燥器中备用。不同薄层活化条件略有不同，如： 硅胶 110℃ 1h 氧化铝 110℃ 30min 点样 要求配制样品的溶剂高度挥发性和尽可能非极性，否则易使斑点扩展。 采用多次点加法，第二次点加时应待前一次点加的溶剂挥发后再进行。 点样量应适中，过载会引起斑点拖尾，分离度变差，以最小检测量的几倍～几十倍为宜。 手工点样工具：定容玻璃毛细管（1 –5ul），微量注射器。 自动点样 Limomat IV 喷样仪——样品溶液通过气流成雾状喷向薄层，移动板台，使在薄层上流下样品条带。 特点：适合于大量稀样品溶液的喷加；条带宽度不超过2mm，有利于改善分辨率；便于狭缝式光密度计扫描；要求薄层板强度高。 自动薄层色谱点样仪——由计算机控制。 药典规定：点样基线距底边1.5cm, 样点直径2-4mm, 点间距离约为1.5-2.0cm。 展开方式 多数采用直线形上行展开，薄层板水平角度以75? 为最佳。展开距离一般为10-15cm。 多次展开——一次展开未达满意分离时，可将薄层板干燥后再次用同一种溶剂展开，可重复多次，直到混合物分离为止。 分步展开——混合物性质差别较大时，一种流动相不能有效分离时，可采用不同溶剂依次展开不同距离。 原点 S R W Ls L。 Lr 原点 参比 样品 前沿 注意： 同一物质在不同展开方式中得到的比移值是不相同的。 在同样溶剂的重复n次的多次展开后的比移值(Rf)n=1-(1-Rf)n 。 相对比移值（Rx） Rf测量中一个重要的误差来源是难以确定溶剂前沿的位置，因此，引入相对比移值（Rx）。 Rx=Ls/Lr 溶 解 能 力 流动相 溶质 吸附 剂 相互作用 竞争 液-液分配 基于组分在互不相溶的两相间的溶解度不同而实现分离的一种展开系统。可在展开前，将薄层板浸入某种液体固定相。实际上在TLC中，分配与吸附是并存的（大气中水分也是一种固定相）。 此外还有：化学键合相反相展开、化学键合相正相展开、离子交换、离子对色谱、凝胶、胶束、手性展开。 溶剂强度参数和选择性 溶剂的强度参数 定义：溶剂强度参数用??表示。流动相强度越高，表示它与吸附剂相互作用力强。溶质的Rf值就越大。为得到满意的分离，选用的流动相使溶质的Rf值在0.3 – 0.7之间为宜。 溶剂强度也可用其在水中的溶解度参数? 来表示。 一些常用溶剂的溶剂强度与溶解度参数 溶剂 ?? ? 溶剂 ?? ? 正己烷 0.01 7.3 环己烷 0.04 8