蛋白质组研究技术解说.pptVIP

第一向进行等电聚焦（isoelectric focusing,IEF）,由于蛋白质具有两性解离和等电点特性，将蛋白质样品加载至pH梯度介质上进行电泳时，会向与其所带电荷相反的电极方向移动。移动过程中，蛋白分子可能获得或失去质子，并随着移动的进行，该蛋白所带的电荷数和迁移速度下降。当蛋白迁移至其等电点pH位置时，其净电荷数为零，在电场中不再移动。根据各自不同的等电点，蛋白质最终被聚焦在一个很窄的pH梯度介质区域内。目前常使用预制胶条（IPG）用于蛋白质的等电聚焦分离，将聚焦好的IPG胶条在含有SDS的缓冲液中平衡 第二向是将在IPG胶条中经过第一向分离的蛋白质转移到SDS凝胶上，根据蛋白质的相对质量或分子量大小与第一向相垂直的分离。样品经过电荷和质量两次分离后，得到等电点和分子量的信息 返 回 蛋白质的检出限与染色方法、起始加样量的关系 以6×107个细胞得到1mg可溶酵母蛋白计算。 返 回 银染（1ng） 考马斯亮蓝染（100ng） 蛋白质的丰度 拷贝数/细胞 细胞数 细胞数 10 1.2×109 1.2×1011 100 1.2×108 1.2×1010 1000 1.2×107 1.2×109 10 000 1.2×106 1.2×108 100 000 1.2×105 1.2×107 激光捕获显微切割示意图 返 回 返 回 2.3 样品预分离（pre-fraction