检测技术方法说课.ppt

三、试纸条的结构及制造工艺 WT 1 2 3 4 5 6 7 8 8 1. 塑料底衬 2. 黏合剂 3. 硝酸纤维素膜 4. 对照线 5. 检测线 6. 交联垫（样品垫） 7. 吸水纸 8. 保护膜 试纸条图解 试纸条结构示意图 工艺流程 原料处理应用 干燥程序 中间检测 粘贴、压膜 切割 成品 半成品质量控制 WT 组装、包装 存放 半成品质量控制 成品质量控制 1. 原料处理应用 单抗预处理：透析、浓缩 点样：检测线、对照线、金标抗原 包被：交联、封闭、其他处理 2. 干燥过程 室温干燥、真空冷冻干燥 水份含量降至4%以下 3. 粘贴、压膜 用薄的黏附层将各个片层组合在一起 黏附层通常包括塑料底衬和覆盖层 WT 4. 中间检测 点样均一 原材料完整、无破损 粘贴整齐 5. 切割 宽度： 检出不合格部分 6. 质量控制 半成品、成品抽检 7. 组装、包装 铝箔袋封装、干燥剂 WT 胶体金及其特点 胶体金即金的水溶液，是一种带负电荷的疏水胶体溶液，颗粒之间由于静电作用而保持一个稳定的胶体状态，可通过还原剂将氯化金分子聚合成特定大小的金颗粒来制备。胶体金通过静电及其表面的物理特性与多种生物大分子结合，形成蛋白质-金颗粒复合物，即胶体金探针。 特点： 1. 标记是物理吸附过程，对生物大分子的活性没有影响。 2. 可以根据用途的不同制备不同直径的胶体金颗粒。 3. 胶体金颗粒的大小与检测的灵敏度和特异性相关。 4. 制备过程简单，易于控制。 试纸条工作原理(HIV为例) 在硝酸纤维素膜的检测线上包被有HIV特异性抗原，对照线上包被有兔抗HIV抗体，另一个HIV特异性抗原在标记胶体金后干燥于硝酸纤维素膜下端的玻璃纤维上。 当样品由于层析原理流动时，首先溶解干燥的金标HIV抗原，HIV抗体与其反应，在流过检测线时再和另一个抗原结合形成免疫复合物。由于包被抗原被固定在硝酸纤维素膜上，免疫复合物就被留下，逐渐形成肉眼可见的红紫色条带，此时该样品为阳性。继续流动到对照线时，金标HIV抗原和兔抗HIV抗体结合显色，出现对照带。 当样品中不含HIV抗体时，标记胶体金的抗原流过对照线时也可和该处的兔抗HIV抗体结合也可形成红紫色条带，导致对照线显色。 使用金标法试剂的注意事项 标本：适用的血清/血浆/全血等标本的处理 检测程序：样品量保证/反应时间保证，等 判定的要求：规定时间内 贮存的条件：4~30℃，室温干燥 有效期：18个月 质量控制 质量控制（Quaility Control,Q.C）　　质量控制是监视全过程，排除误差，防止变化，维持标准化现状的一个管理过程。这一过程是通过一个反馈环路进行的。　　1）确定控制的对象；　　2）规定控制对象的标准（预期值）；　　3）制定或选择控制方法和手段；　　3）测量实际数据；　　4）比较或较对实际数据与预期值之间的差异，并说明产生这一差异的原因。超出预定误差范围，报警系发出信号，反馈通道中断。　　5）采取行动，解决差异。恢复原状（原标准状态）的手段发挥作用。 误差 实验误差分为三种：系统误差、随机误差和过失误差。　　 系统误差是指一系列测定结果与真值或靶值存在有同一倾向的误差，有明显的规律性，可在一定条件下重复出现，是可以通过质控预防和校正的。　　 随机误差又称偶然误差，是一种偶然的、未能预料到的误差，是难以避免和校正的误差。检验工作中随机误差的分布符合正态分布规律。　　 过失误差是人为的责任误差。通过加强实验室管理和开展质量控制工作是可以避免的。 真值 用确切的、最理想的决定性方法测得的值，称为真值。真值一般是测不到的。通过可靠的决定性方法测出的值，称为靶值，通常用靶值来表示真值的大小。 准确度 是指测定结果与真值（或靶值）接近的程度。准确度不能以数字表示，往往用不准确度来衡量。测定结果与靶值的偏离程度称为偏差，它表示该项检验的不准确度。　　绝对偏差=检验的均值-真值（或靶值）　　相对偏差=绝对偏差真值÷（或靶值）×100% 精密度 是指对同一样本重复测定时，每次测定结果与平均值的接近程度，即重复测定值之间的符合程度。 标准品 1、国际标准品 由WHO或相应组织标定的，用肯定的、公认的、准确的物理或化学方法测定的定值材料。 2、国际生物学活性标准品根据生物学反应由WHO或相应组织标定的国际活性单位的材料。 3、参考标准血清 国家标准化组织根据国际标准化生产的法定