植物组织培养简述和troubleshooting.docVIP

植物组织培养 植物组织培养，又称离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞、原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。按培养方式可分为固体培养、液体培养。固体培养是最常用的方法。 试验流程： 准备培养基：一是购买培养基中所有化学药品，按需自己配制；二是购买成品，如常用的MS培养基（M519/M5519）。 灭菌：灭菌是组织培养重要的工作之一。通过严格的操作空间（接种、超净台）和使用的器皿，以及操作者的衣着和手都不带任何活着的微生物来实现无菌操作。 外植体的选择、分离：选择无病害的植物，通过适当的酶解处理，如纤维素酶（C214/C224/C234）、离析酶R-10（M481）、果胶酶（P686）。外植体也需要用70%酒精消毒30s、10%次氯酸钠溶液灭菌10min、无菌水冲洗三至四次。 接种：接种是将已消毒好的根、茎、叶等离体器官，经切割或剪裁成小块，放入培养基（M519/M5519）的过程。 培养：培养指把培养材料放在培养室里，使之生长、分裂和分化形成愈伤组织或进一步分化成再生植株的过程。此过程需要一些植物生长调节剂进行调节，如脱落酸（A102）、赤霉素3（G500）、玉米素（Z860）等。 筛选：利用目的植株对抗生素的抗性，筛选培育出的阳性植株。常用的抗性筛选试剂，如氨苄青霉素（A116）、卡那霉素（K378）、利福平（R501）等。 炼苗移栽：选择生长健壮的生根苗进行室外锻炼，待苗适应外部环境后，即可开始移栽。 植物组织中常见问题分析： 初代培养中外植体经常出现褐变现象，原因是什么？ 外植体接种后其表面开始河边，它的出现是由于组织中多酚氧化酶被激活，而使细胞的代谢发生变化所致。原因如下：a. 不同植物品种的酚氧化酶活性不同，褐变阈值不同；且一般幼嫩组织接种后褐变程度不明显，老熟组织褐变严重；因此培养时应有所选择，对不同品种分别进行处理。b. 培养基中浓度过高的无机盐会使植物褐变程度增加，细胞分裂素的水平过高也会刺激某些外植体的多酚氧化酶活性而加深褐变现象。c. 光照过强、温度过高、培养时间过长等，均可加速褐变。 若想提高组织培养成苗率，如何控制褐变现象？ a. 选择处于生长旺盛的外植体。b. 合适的培养条件，如无机盐成分、生长物质浓度、适宜的温度。c. 及时的继代培养。d. 使用抗氧化剂处理，如半胱氨酸、抗坏血酸等。e。连续转移到新的培养基上。 3. 继代培养时出现玻璃化现象，有何影响？ 植物材料不断进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会呈现半透明水迹状，称为玻璃。会导致试管苗生长缓慢、繁殖系数下降。 怎么预防和控制玻璃化现象？ a. 在培养基中添加一定量的聚乙烯醇、脱落酸等。b. 减少培养基中的氮化合物用量。c. 增加容器通风，进行CO2施肥。d. 考虑变温培养。 5. 常用的MS培养基有何特点？ MS培养基特点是：a. 无机盐浓度高。b. 高含量的氮、钾，尤其是硝酸盐。c. 有一定数量的铵盐，营养丰富。d. 不需要添加更多的有机附加物。 外植体的消毒选择次氯酸钠还是氯化汞比较好？ 根据实验材料和实验条件选择。一般二者均可用。次氯酸钠是一种强氧化剂，对细菌、真菌、芽胞及病毒都有效，且分解后易于除去，不留残毒。氯化汞是一种极强的杀菌剂，但主要对细菌和真菌有效，对芽胞、病毒的效力差，甚至无效，对人体有剧毒。 愈伤组织有的很松脆，有的很坚实，怎么调节和控制？ 通常，加入高浓度的生长物质，可使坚实的愈伤组织变为松脆，反之，降低或出去生长物质，则松脆的愈伤组织可转变为坚实。松脆的愈伤组织都有大量的分生组织中心，进行活跃的细胞分裂，是进行悬浮培养最适合的材料，稍经机械振动，即可分散成单细胞或小细胞团。 愈伤组织的形态发生，在实验时都有哪些因素会影响其调控？ a. 材料本身的影响，如材料的部位、年龄。b. 培养基各种成分和物理性质都对器官发生产生影响，主要是生长素和细胞分裂素的配比。c. 培养的环境条件，如光照、温度。 9. 植物离体繁殖时，有哪些措施减少体细胞变异？ 采用生长点、腋芽生殖、胚状体繁殖的方式可以有效的减少变异缩短继代时间，另外采用适当的生长调节物质种类和较低的浓度，减少培养基中容易引起诱变的化学物质，定期检测，及时剔除生理、形态异常苗，均可以提高遗传稳定性，减少变异。 货号 品名 规格 报价 MS基本培养 50L 噻苯隆 100mg 反玉米素 100mg 玉米素 10ml 反玉米素核苷 50mg 赤霉素3 1g 脱落酸 100mg 纤维素酶R-10 10g 纤维素酶RS 10g 离析酶R-10 10g 果胶酶Y-23