小鼠实验胚胎技术与应用黄冰材料.ppt

小鼠实验胚胎技术与应用 眼科学实验动物中心 黄冰 提纲 一、小鼠实验胚胎技术 1、母鼠超数排卵 2、胚胎收集 3、胚胎体外培养 4、假母制备 5、胚胎体内移植 二、应用:转基因动物模型的制作 1、定义 2、制作方法和原理 小鼠实验胚胎技术 超数排卵：给予发情间期的母鼠一定量的促进卵泡成熟和卵子排放的激素，母鼠可以同时段排放比正常排卵数多一倍以上的成熟卵子。 PMSG（孕马血清促性腺激素）：促进卵泡成熟。 HCG（人绒毛膜促性腺激素）：促进卵泡成熟和卵子排放。 假母：性成熟的母鼠在与结扎公鼠交配后，子宫内膜会处于增殖和接受胚胎着床的生理状态。一旦有胚胎进入子宫腔内，胚胎便可以在其子宫内着床发育成个体。 鼠类动物、兔子有此特性，其他动物需借助激素。 小鼠实验胚胎技术的应用 ----转基因动物模型的制作 转基因动物: 转基因动物(transgenic animal)是指以实验手段导入的外源基因在其基因组内稳定整合并能遗传给后代的一类动物。 转基因动物模型: 转基因动物模型(transgenic animal model)是指利用转基因动物制作手段导入的人类疾病基因在其基因组稳定整合、遗传并表达产生类似于人类疾病的一类动物。 LIM1基因敲除无脑小鼠 震颤小鼠与多发性硬化 震颤小鼠与多发性硬化 精体载体法： 将外源基因附着在精子上，通过体外受精或单精子注射法将外源基因导入受精卵；在受精卵DNA复制过程中外源基因随机整合入受体基因组。 精体载体法流程图 目的基因克隆、纯化 与精子共孵育 卵子 体外受精或单精子注射 受精卵DNA复制，外源基因整合 双细胞期胚胎假母体内移植 产生个体 外源基因阳性个体筛选 阳性个体的培育和建群 精体载体法特点： 优点：简单 不需要构件特殊的载体 单纯的外源基因DNA片段 缺点：成功率低 雄原核注射法： 通过显微注射的方法将外源基因注射入受精卵的雄原核区；在受精卵DNA复制过程中外源基因随机整合入受体基因组。 雄原核注射法流程图 目的基因克隆、纯化 显微注射至受精卵雄原核 受精卵DNA复制，外源基因整合 双细胞期胚胎假母体内移植 产生个体 外源基因阳性个体筛选 阳性个体的培育和建群 雄原核注射法特点： 优点：相对简单、成功率高 不需要构件特殊的载体 单纯的外源基因DNA片段 成功率可达5%～25% 缺点：需要昂贵的仪器设备 显微注射仪、拉针仪、煅针仪 胚胎感染法： 将外源基因连接上逆转录病毒载体，再让逆转录病毒载体感染着床前后的胚胎，外源基因随机整合入受体基因组。 胚胎感染法流程图 目的基因克隆、纯化、逆转录病毒载体的构建 体外感染着床前胚胎 体内感染着床前、后胚胎