致突变作用及检测方法材料.pptVIP

一、DNA损伤的修复 1、光修复 2、“适应性”反应 3、切除修复 4、双链断裂修复 5、交联修复 1、光修复 它通过酶切下DNA上嘧啶二聚体，将毗连的嘧啶接回原结构上，依赖光裂合酶，是一种依赖光的过程，主要针对紫外线损伤产生的胸腺嘧啶二聚体的修复机制。广泛存在于原核生物和真核生物体内。 2、”适应性“反应 烷基转移酶 O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶 酵母、大鼠、人类 3、切除修复 （1）核苷酸切除修复 （2）碱基切除修复 （3）错配修复 最常见的修复机制，可修复所有种类的DNA损伤；但不能去除较大的DNA加合物及DNA链间交联。 DNA糖基酶；专一性更强。 4、双链断裂修复 复制继续进行，DNA损伤部位存在。是一种耐受过程，一种以容忍损伤继续存在和高突变率情况下，以换取细胞继续生存的耐受过程。 5、交联修复 （1）无误交联修复 （2）易误交联修复 遗传因素对致突变作用的影响 环境因素 机体 肿瘤（癌） 先天性：遗传多态性 后天性：不同生活方式 损伤 修复 突变 1、代谢酶遗传多态性 2、修复功能的个体差异 P－450、乙醇脱氢酶、乙醛脱氢酶、N-乙酰基转移酶、酯酶、、、 （1）O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（MGMT） （2）聚（二磷酸腺苷－核糖）多聚酶（PARP） 五、常用致突变实验方法 1、观察项目的选择 2、常用的致突变实验 3、致突变实验中的一些问题 一、观察项目的选择 1、观察效应终点的类型 遗传终点（genetic endpoint）： 试验观察到的现象所反映的各种事件。 基因突变实验 染色体畸变实验 DNA损伤实验 ①DNA完整性的改变（形成加合物、断裂、交联） ②DNA重排或交换 ③DNA碱基序列改变 ④染色体完整性改变 ⑤染色体畸变 遗传终点 2、成套的观察项目 遗传毒理学评价程序： （1）选择的遗传毒性试验包括5种类型的遗传学终点； （2）包括多种进化程度不同的物种：原核细胞、低等、高等真核细胞； （3）体内试验与体外试验配合。 食品 1、Ames试验 2、小鼠骨髓微核试验或骨髓细胞染色体畸变分析 3、小鼠精子畸形分析和睾丸染色体畸变分析 4、其他 化妆品 1、Ames试验 2、体外哺乳动物细胞染色体畸变 3、哺乳动物骨髓细胞染色体畸变率检测试验 4、动物骨髓微核试验或骨髓细胞染色体畸变分析 5、小鼠精子畸形检测试验 当体内体细胞致突变试验得到阳性结果，并有生殖细胞接触证据时，再进行哺乳动物生殖细胞致突变试验。 对于一种受试物应当先用原核细胞或体细胞的体外试验按遗传学终点合理配套进行试验，并对有阳性结果的遗传学终点试验验证其在体内的真实性，必要时再选用生殖细胞致突变试验进行遗传危害的评价。 二、常用的致突变试验 1、细菌回复突变试验（Ames 试验） 2、哺乳动物体细胞株突变试验 3、染色体畸变分析 4、微核试验 5、显性致死试验 6、果蝇伴性隐性致死试验 7、姐妹染色单体交换试验 8、程序外DNA合成试验 体外基因突变实验 细胞遗传学实验 体内基因突变实验 DNA损伤实验 1、细菌回复突变试验（Ames） Ames BN，1979年建立 鼠伤寒沙门氏菌、大肠杆菌 利用突变体的测试菌株，观察受试物能否纠正或补偿突变体所携带的突变改变，判断其致突变性。 原理： 人工诱变的突变株在组氨酸操纵子中有一个突变，突变的菌株必需依赖外源性组氨酸才能生长，而在无组氨酸的培养基上不能存活，致突变物可使其基因发生回复突变，使它在缺乏组氨酸的培养基上也能生长。 试验用菌株：TA100、TA98、TA97、TA102。 试验方法：平板掺入法、点试法、预 培养法。 2、哺乳动物体细胞株突变试验 常用细胞株： 中国地鼠肺细胞V79、中国地鼠卵巢细胞CHO、小鼠淋巴瘤细胞L5178Y 中国地鼠肺细胞V79、中国地鼠卵巢细胞CHO：缺乏利用嘌呤碱的一种酶HGPRT 小鼠淋巴瘤细胞L5178Y：缺乏胸苷激酶TK * * 致突变作用及检测方法 祝建洪 一、基本概念 遗传：生物物种通过各种繁殖方式来保证世代间生命延续的过程。 变异(variation)：亲子间或子代个体间出现的差异。 1. 遗传学基础 1、DNA与基因 2、染色质与染色体 3、体细胞与生殖细胞 4、基因型与表型 5、细胞周期、有丝分裂、减数分裂 DNA与基因 （1）DNA的化学结构： DNA由许多核苷酸组成，每个核苷酸又由三部分构成： 一个脱氧核糖 一个磷酸根 一个碱基 DNA中有4种碱基：A、G、C、T DNA即由4种核苷酸构成的长链。 （2）DNA空间结构：DNA是由2条多核苷酸相连而形成