高效液相色谱分析讲述.pptVIP

* 仪器 分析 High-Performance Liquid Chromatography，HPLC 3.1 高效液相色谱法的特点 3.2 影响色谱峰扩展及色谱 分离的因素 3.3 类型及分离原理 3.4 高效液相色谱法的应用 目　录 仪器分析学习指导 (四年制) 第三章 高效液相色谱分析 高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代末发展起来的一种新型分离分析技术，已成为化学、生物化学与分子生物学、农业、环保、商检、药检、法检等学科领域与专业最为重要的分离分析技术。 它在技术上采用了高压泵、高效（化学键合）固定相和高灵敏度检测器，具备高压、高速、高效的特点。 仪器分析学习指导 (四年制) 第3章 高效液相色谱分析 3.1 高效液相色谱法的特点 仪器分析学习指导 (四年制) 第3章 高效液相色谱分析 固定相——柱内填料或固定液 流动相——洗脱剂 HPLC是利用样品中的溶质在固定相和流动相之间分配系数的不同，进行连续的无数次的交换和分配而达到分离的过程。 液相色谱的基本原理 仪器分析学习指导 (四年制) 第3章 高效液相色谱分析 液相色谱的特点： 流动相为液体 增加高压泵、梯度洗脱装置 通常在室温下操作 分子扩散小 粘度、密度大，传质阻力大 温度高易产生气泡 流动相的组成随时间而改变 仪器分析学习指导 (四年制) 第3章 高效液相色谱分析 操作基本流程 1高压输液系统 2进样系统 3 色谱系统 4. 检测器 4检测系统 仪器分析学习指导 (四年制) 第3章 高效液相色谱分析 流动相的组成随时间而改变 仪器分析学习指导 (四年制) 第3章 高效液相色谱分析 高效液相色谱仪 高效液相色谱仪 仪器分析学习指导 (四年制) 第3章 高效液相色谱分析 高效液相色谱与气相色谱的对比 相同点： 基本原理、基础理论相同 不同点： 分析对象、流动相、操作条件的差异 仪器分析学习指导 (四年制) 第3章 高效液相色谱分析 气相色谱法 高效液相色谱 在较高温度下进行 在室温条件下进行 高压 仪器分析学习指导 (四年制) 第3章 高效液相色谱分析 高效液相色谱与气相色谱的比较 气体和沸点较低的化合物,占有机物总数的20％ 高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质,占有机物总数近80％ 流动相是惰性气体无毒，易处理，运行和操作容易 流动相是不同极性液体；流动相有毒，费用较高 低沸点有机化合物,永久性气体 低、中、高沸点有机化合物,离子型无机化合物,热不稳定化合物 生物活性分子 应用范围 热导池检测器等 紫外光度检测器、荧光检测器等 检测器 吸附和分配 吸附,分配,筛析,亲和等 分离原理 样品需气化或裂解 样品制成溶液 进样方式 气相色谱法 高效液相色谱法 项 目 高效液相色谱与气相色谱的比较 仪器分析学习指导 (四年制) 第3章 高效液相色谱分析 固定相 流动相 1 传质快 2 寿命长 3 耐水、耐光、 耐有机溶剂，稳定 4 选择性好 5 有利于梯度洗脱 1 样品有合适的极性和良好的选择性 2 与检测器匹配 3 高纯度 4 化学稳定性好 5 低粘度（粘度适中） 仪器分析学习指导 (四年制) 第3章 高效液相色谱分析 3.2 影响色谱峰扩展及色谱分离的因素 仪器分析学习指导 (四年制) 第3章 高效液相色谱分析 基础 理论 热力学理论：塔板理论——平衡理论 动力学理论：速率理论——Vander方程 在高效液相色谱中, 液体的扩散系数仅为气体的万分之一，则速率方程中的分子扩散项B/U较小，可以忽略不计，即： H = A + Cu ◆液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同。 仪器分析学习指导 (四年制) 第3章 高效液相色谱分析 ◆液体的粘度比气体大100倍，密度为气体的1000倍，故降低传质阻力是提高柱效主要途径。 ◆由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。 ◆液相色谱中不可能通过增加柱温来改善传质。恒温。 ◆改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。 1 选粒径小的、分布均匀的球形固定相 （dp≤10μm） 2 选粘度小的流动相。 3 在一定范围内减小流速。 4 选室温250C左右 5 提高装柱技术，能使涡流扩散项减小， 提高柱效。 仪器分析学习指导 (四年制) 第3章 高效液相色谱分析 液相色谱分离的条件： 谱峰扩展 （谱峰展宽） 柱内展宽因素 涡流扩散 传质阻力（主要因素） 柱外展宽因素 进样器、连接管 检测器体积 仪器分析学习指导 (四年制) 第3章 高效液相色谱分析 3