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基因工程的概念: 基因工程又叫基因拼接技术或DNA重组技术。该技术是在生物体外,通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”,对生物的基因进行改造和重新组合,然后导入受体细胞内进行无性繁殖,使重组基因在受体细胞内表达,产生出人类所需要的基因产物。 (一)基因工程的概念 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 结果 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 基因工程培育抗虫棉的简要过程: 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 重组DNA 导入 形成 基因工程培育抗虫棉的关键步骤: 关键步骤一: 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 关键步骤二: 形成重组DNA 关键步骤三: 重组DNA导入受体(棉花)细胞 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具? 关键步骤一的工具: 关键步骤二的工具: 关键步骤三的工具: 基因的剪刀——限制性核酸内切酶 基因的针线——DNA连接酶 基因的运输工具——运载体 第一节 DNA重组技术的基本工具 一、 “分子手术刀” ——限制性核酸内切酶 识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶。 4000种。 1、来源: 2、种类: 3、作用: 4、结果: 形成两种末端 一、 “分子手术刀” ——限制性核酸内切酶 黏性末端 平末端 酶的特异性 大肠杆菌(E.coli)的一种限制酶EcoRΙ能识别GAATTC序列,并在G和A之间切开。 EcoRΙ EcoRΙ 什么叫黏性末端? 被限制酶切开的DNA两条单链的切口,带有几个伸出的核苷酸,他们之间正好互补配对,这样的切口叫黏性末端。 什么叫平末端? 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时,切开的DNA两条单链的切口,是平整的,这样的切口叫平末端。 1、…CTGCAG… 2、…GCGC… 2、 “分子缝合针” ——DNA连接酶 作用——把2个DNA片段末端之间的缝隙“缝合”起来。 G A A T T C C T T A A G 即脱氧核糖、磷酸基之间的连接 G P A P 限制酶切割后有两种不同的结果,一种产生黏性末端,一种产生平末端。那么恢复它们的连接时,所用DNA连接酶是否一样呢? DNA连接酶的种类: E.coliDNA连接酶:连接黏性末端 T4DNA连接酶:连接黏性末端和平末端 3、基因进入受体细胞的工具 种类:质粒、噬菌体和动植物病毒 要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达,还得将这个基因送到乙生物的细胞内去!能将外源基因送入细胞的工具就是运载体。 作用:将重组基因导入受体细胞 质粒 拟核 大肠杆菌细胞 质粒的特点 1、细胞染色体(或拟核DNA分子)外能自主复制的小型环状DNA分子; 2、质粒的存在对宿主细胞无影响; 3、质粒的复制只能在宿主细胞内完成。 作为运载体的必要条件 1.能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 2.具多个限制酶切点,以便与外源基因连接。 3.具有某些标记基因,便于进行筛选。 如:抗菌素的抗性基因、 产物具有颜色反应的基因等。 4.对受体细胞无害。
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