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微生物的遗传和变异 微生物的变异现象 形态和结构的变异 毒力变异 耐药性变异 菌落变异 基因变异的机制 基因的突变 基因突变的规律 基因的转移与重组 供体→转移→受体→重组→基因整合 方式：转化、接合、转导、真核生物的基因重组 F因子转移的机制 根据F因子在E. coli中的有无，及与染色体的关系，可将E. coli分为四种类型： F－菌（雌性菌） 细胞中不含有F因子， 细胞表面不具有性菌毛。 可以通过与F+、F’或Hfr菌株接合而接受供体菌的F因子、 F’因子或Hfr菌株的部分或全部遗传信息，相应地可以转变成F+菌株、 F’菌株或重组子。 据估计，从自然界分离到的2000株E. coli中约有30%是F–菌株。 局限性转导 利用菌种自发突变进行菌种选育。 纯化菌种、稳定生产、提高发酵产量 方法：单菌落分离法 菌种制成单孢子悬液或单细胞悬液，经过适当稀释后在琼脂平板上分离。然后挑选单个菌落进行生产能力测定，从中选出优良的菌株。 第二节 自然选育 第三节 诱变育种 是用物理或化学的诱变剂使诱变对象内的遗传物质（DNA）的分子结构发生改变，引起性状变异并通过筛选获得符合要求的变异菌株的一种育种方法。 诱变育种具有极其重要的实践意义。当前发酵工业和其他微生物生产部门所使用的高产菌株，几乎毫无例外地都是通过诱变育种而明显提高其生产性能的。 一、突变的诱发 （一）菌种的斜面 选取对诱变剂最敏感的已知最佳培养基和培养条件 （二）单孢子悬液制备 （三）孢子计数 计算诱变致死率。 （四）单菌落分离 分离的孢子液涂布均匀后培养。 二、突变株的筛选 筛选是最为艰难的也是最为重要的步骤. 实际工作中，为了提高筛选效率，往往将筛选工作分为初筛和复筛两步进行。 初筛的目的：删去明确不符合要求的大部分菌株，把生产性状类似的菌株尽量保留下来，使优良性状的菌株不至于漏网；——因此，初筛工作以量为主，测定的精确性还在其次；初筛手段应尽可能快速、简单。 复筛的目的：确认符合要求的菌株；——复筛以质为主，应精确测定每个菌株的生产指标。 以选育高产突变株为例，诱变育种的基本环节概括如下： 第一轮： 一个出发菌株→→→→选出200个菌株→→→→→选出50株 →→→→→选出5株 诱变处理 初筛 （每瓶一株） 复筛 （每瓶四株） 第二轮： 5个出发菌株→→→→ →→ → 选出50株 →→ →选出5株 40株 40株 40株 40株 40株 诱变处理 初筛 复筛 （每瓶一株） （每瓶四株） 选出5株 →→→→ 复筛 （每瓶四株） 突变株的筛选方法 随机筛选 摇瓶筛选法 琼脂块筛选法 理化性筛选 运用遗传学、生物化学原理，根据产物已知的或可能的生物合成途径、代谢调控机制和产物分子结构来进行设计和采用一些筛选方法。 第六节 菌种保藏 目的： 存活，不丢失，不污染 防止优良性状丧失 随时为生产、科研提供优良菌种 原理 选用优良的纯种，（最好是休眠体，如分生孢子、芽胞等），创造降低微生物代谢活动强度，生长繁殖受抑制，难以发生突变的环境条件。（其环境要素是干燥、低温、缺氧、缺营养 以及添加保护剂等） 方法： 低温保藏法 方法：菌种管置4℃冰箱保藏，定时传代 原理：低温下，微生物代谢强度明显下降 。 石蜡油低温保藏法： 橡皮塞取代棉塞、加石蜡油。 干燥保藏法 将菌种置于土壤、细纱、滤纸、硅胶等干燥材料上保藏。如砂土管法，适用于放线菌、芽孢菌和某些真菌保藏，保藏时间几至几十年。 真空冷冻干燥法 加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干燥。 适用于各种微生物，便于大量保藏，菌种存活时间长，是目前最好的保藏方法。 液氮超低温保藏法 将菌种置于保护剂中，预冻后保存在液氮超低温冰箱中（ -196℃）。 适用于各种微生物的较理想的保藏方法。 干法保藏菌种的方法 几种常用菌种保藏方法的比较 菌种的衰退、复壮 菌种的衰退（degeneration） 菌种在培养或保藏过程中，由于自发突变的存在，出现某些原有优良生产性状的劣化、遗传标记的丢失等现象，称为菌种的衰退。 菌落和细胞形态的改变 生长速度缓慢，产孢子越来越少 抵抗力、抗不良环境能力减弱等 代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力下降 菌种的复壮（rejuvenation）： 使衰退的菌种恢复原来优良性状。 菌种的复壮措施 纯种分离：（平板划线法、涂布法、倾注法、单细胞挑取法等）。 通过寄主体内生长进行复壮 平板影印培养试验（replica plating） 1952年，J. Lederberg夫妇的论文《平板影印培养法和细菌突变株的间接选择》 把长有许多菌落的母种培养皿倒置于包有灭菌丝绒布的木质圆柱印章上，使其沾上来自平板上的菌落。然后可把这一“印章”上的菌落一一接种到不同的选择性培养基平板上。待这些平板培养后，对