酵母菌形态观察、显微计数与显微测量.ppt.pptVIP

实验考核办法： 1、平时成绩占70%，期末卷面成绩占30%。 2、每次实验课预习报告占30分，实验操作占50分，结果与讨论（实验报告）占20分；∑实验得分/9，为平时成绩。 3、出现安全责任事故，实验课成绩记为不及格；无故缺课一次，本次实验为零分；迟到或早退一次，扣20分；逃避值日或实验后未整理实验台，扣20分；喧哗、接听手机、随意走动，扣10分。 实验四、酵母菌形态观察、显微计数与显微测量技术 二、实验材料 1、培养12～48小时的啤酒酵母。 2、显微镜，目镜测微尺，镜台测微尺、血球计数板等。 三、实验内容 （一）酵母菌形态观察 1、原理：酵母菌为不运动的单细胞真核微生物，细胞呈圆形、卵圆形或圆柱形。用美蓝染色液可对酵母菌细胞进行死活鉴别。活的酵母细胞，因体内新陈代谢旺盛，氧化还原电位较低，能把美蓝还原为变为无色的美白。因此，染色后活细胞无色，死细胞呈蓝色，而衰老细胞则呈淡蓝色。 2、水浸片法观察酵母细胞形态及无性繁殖方式 滴加一滴碘液于干净载玻片中央，按无菌操作要求，用接种环取少量啤酒酵母培养物于碘液中混匀，使呈轻度浑浊。加一洁净盖玻片，注意勿产生气泡，制成染色水浸片。高倍镜下观察酵母细胞形状、大小及出芽情况。 （二）微生物细胞大小的测定 原理：微生物细胞的大小是微生物分类鉴定的重要依据之一。测量微生物细胞大小，必须借助于测微尺和显微镜。 测微尺由镜台测微尺和目镜测微尺两部分组成。使用前须先用镜台测微尺进行标定，求出某一放大率下，目镜测微尺每一小格所代表的长度，然后用目镜测微尺直接测量细胞的大小。 1、目镜测微尺的校正 （三）微生物细胞的镜检计数 原理：显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上，于显微镜下直接计数的一种简便，快速，直观的方法。目前常用的有：血细胞计数板，Peterff-Hause计菌器以及Hawksley计菌器等，都用于酵母，细菌，霉菌孢子等悬液的计数，基本原理相同。 优点是直观，快速，操作简单； 缺点是所得的结果通常是死菌体和活菌体的总和。 血球计数板结构示意图 1、菌悬液制备：用无菌水将菌液稀释至适当倍数（100倍）； 2、将血球计数板及专用的厚盖玻片擦干净后，盖玻片盖在中央的计数室上； ??? 3、加样品：用无菌的吸管将菌悬液在盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，吸去多余的菌液； 4、显微镜计数：加样后静止片刻，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。 四、实验报告 1、绘制出酵母菌细胞形态图。 2、计算所观察酵母的大小。 3、计算酵母菌培养液的浓度。 4、说明如何校正目镜测微尺？ 5、说明酵母菌美兰染色判断死活的原理。 * * 生命科学学院微生物学系 电话：8242908 教材： 《微生物学实验》沈萍等 高等教育出版社 参考教材： 《农业微生物学实验技术》李阜棣 中国农业出版社 《微生物学教程》（第二版） 周德庆 《Microbiology 》(5th ed) Black J G. 2002 《微生物生物学》杨苏声 周俊初 科学出版社 2004 《现代微生物学》刘志恒 科学出版社 2002 微生物学实验课的目的在于加强课堂讲授的基本理论与基本知识的理解，掌握研究微生物最基本的操作技能和实验手段，培养分析问题和从事实践应用的能力。为上好实验课，必须做到： 安全第一！注意水、电、门、窗安全；如有意外，及时报告 严守纪律！严禁迟到、喧哗，吸烟、接打电话，做与实验无关的事情，不要随意走动。 认真完成实验。实验前预习，明确实验目的、原理、方法；实验操作要细心谨慎，认真进行观察和记录，培养严谨求实的科学态度；认证完成实验报告。课上认真听讲，课后积极讨论 爱惜仪器，保持秩序。每次实验之后必须清理好实验台，待实验老师检查之后才能离开。 实验内容 实验一、显微镜的使用与单染色法 实验二、革兰氏染色与荚膜染色 实验三、放线菌形态观察与芽孢染色 实验四、酵母菌形态观察、显微计数与显微测量技术 实验五、霉菌形态观察与各大类微生物菌落特征 实验六、培养基的制备 实验七、菌种分离纯化技术与平板菌落计数 实验八、水质微生物学检测 实验九、消毒与灭菌技术 一、实验目的 1、认识酵母菌的细胞形态并能通过染色鉴别其死活。 2、了解测微尺的原理并掌握细胞大小测定法。 3、了解血球计数板的构造并熟练掌握镜检计数法。 3、死活酵母细胞的染色鉴别 加一滴0.1％美蓝染色液于干净载玻片中央，按无菌操作要求，用接种环取少量啤酒酵母培养物于美蓝染液中混匀。加盖一洁净盖玻片，注意不要产生气泡。高倍镜下观察，活细胞无色，死细胞蓝色，而衰老